Flashcards
Phage display
Cards in this deck (27)
- 1Utilité des Anticorpslocaliser une protéine
Etudier la FONCTION d'une protéine
Etudier les interactions entre les protéines - 2Anticorps recombinantAnticorps dont on connait la séquence d'ADN
monoclonal - 3Bactériophage filamenteux M13- Non lytique
- ADN CIRCULAIRE simple brin
- 11 protéines
- Infecte que E.Coli par pillus sexuel via la protéine P3 - 4Phage helper =bactériophage M13 avec une efficacité d’encapsidation réduite
- 5Protéine TolAProduite par la bactérie--> dépolymérise le pili de la bactérie pour éviter double infection
- 6ThioredoxineRecouvre ADN simple brin
- 7Inconvenient de la séléction d'Atc in vivoCouts
Experimentation animale
ø Spécifique
Perte d'information
--> Alternative Phage Display - 8Quelle machinerie utilise le bactériophageMachinerie de l'hôte
- 9Poids moléculaire d'un Atc scFv150kDa
25kDa - 10nanobodyDonne moins de diversité possible comparé aux scFv
- 11Affichage multivalent de scFVTous les P3 expriment un scFV
Affinité moyenne pour l'Ag - 12Affichage monovalent1scFV par bactériophage
Affinité forte pour l'Ag - 13Type 31 gève avec scFV+ P3
- 14Type 332 gènes
a) scFV + P3 promoteur faible
b) P3 promoteur fort - 15—,
- 16librairie de phage10^12 phages
- 17libraries synthétiquesen faisant une mutagenese aléatoire des CDR du VH et VL
CDR = Complementarity Determining Regions - 18BiopanningSélection des bactériophages d'intéret (par elisa)
- 19Avantage du phage display
- 20Les 2 principales facon de créer des Atc recombinantIn vivo: à partir d'hibridome
In vitro: gène synthétiques - 21Combien de P3 par bactériophage5
- 22Lors de la sortie phage M13 après avoir infecté la bactérie, quelles protéines remplacent la P5P7,P8,P9
- 23Caractéristique du phagmide- double brin
- possède cassette résistance antibio
- OR bactérie + OR batériophage
- gène de fusion scFV-P3 promoteur faible
- ne produit pas les 11 protéines, empeche au bactériophage qui a inséré le phagmide de pvr effectuer un cycle complet - 24Utilité de la cassette de résistance du phagmidepermet d’éliminer les bact qui ont été infecté par bactériophage ayant intégré l’ADN du phage helper (contient pas de scFV)
- 25Les etapes du phage display
- 26Phage rescueamplification des phages sélectionnés au round 1 et augmenter l'affinité de l'Atc pour l'Ag
- 271 colonie =1scFV monoclonal
1Ecoli contenant chacun 1 scFV
Information
- Description
- Immunodetection Flashcards on Phage display, created by Alessia D'Esposito on 09/01/2020.
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- Alessia D'Esposito
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