TINCIONES

Preparaciones y tinciones microbiológicas

Preparaciones húmedas

Preparaciones fijas

También llamadas examen en fresco

Se utilizan para observar microorganismos vivos en una suspensión acuosa

Permite observar: cantidad, morfología y movilidad

Se puede realizar sin colorantes o con colorantes vitales

Algunos ejemplos de colorantes vitales son: el azul de metileno, rojo congo, rojo neutro, verde Janus, etc.

Preparaciones húmedas sin colorante

Preparaciones húmedas con colorante

Medio líquido

Medio solido

-Se toma una alícuota de la muestra, se coloca en el centro del portaobjetos con una pipeta y se cubre con un cubreobjetos evitando la formación de laminillas

Colocamos primero unas gotas de agua destilada en el portaobjetos, posteriormente colocamos una alícuota de la muestra y se cubre con un cubreobjetos

Medio liquido

Antes de depositar la alícuota de mi muestra, se coloca una gota de colorante vital

Se coloca una gota de colorante, después una gota de agua destilada y la alícuota de mi muestra

Medio solido

No podemos observar la movilidad de los mircroorganismos

Permite observar: cantidad, morfología y características tintoriales

Utiliza técnicas de tinción

Tipos de colorantes

Vitales

Supravitales

Ejemplos: Giemsa, Fucsina ácida, Lugol, Nigrosina, etc

Propiedades ácido-base

Ácidos

Basicos (+)

Ejemplos: Eusina, Fucsina ácida, Rojo congo

Ejemplos: Azul de metileno, Safranina, Cristal violeta

Tipos de tinciones

Tinciones diferenciales

Tinciones selectivas

En la fase de estas tinciones hay 2 etapas

1. Colorante primario

2. Colorante secundario

(+) Retiene el colorante primario

(-) Se tiñe con el colorante de contraste

Ejemplos de tinciones diferenciales

Tinción de Gram

Tinción de Ziehl - Nelsen (BAAR)

Casi siempre es la primera prueba de identificación de microorganismos causante de enfermedades

Pasos

1-.Aplicar el colorante Cristal violeta sobre el portaobjetos y esperar un minuto.

2.Enjuagar la muestra con agua y aplicar un mordiente, Lugol

3.Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos segundos.

4. Añadir una tinción de safranina para distinguir las gram negativas que aparecerán con un tono rosado o rojo. Lavar con agua.

Fundamento: Se basa en las diferencias de la estructura y composición de la pared celular de los microoorganismo

- Las Gram * se tiñen del colorante cristal violeta. Mientras que las Gram - del colorante de contraste Safranina

BAAR: Bacilos Alcohol Acidos Resistentes

Utilizada para la tinción de Mycobacterium

Las BAAR+ se tiñen del colorante Fucsina. Mientras que las BAAR - se tiñen de Azul de metileno

Pasos

1. Aplicar el colorante Fucsina y calentar x 10 minutos (cuida que la muestra no se queme)

2. Lavar el portaobjetos con una solución Alcohol-Acido

3. Añadir el colorante de Azul de metileno x 3 minutos

Son de mayor interés en los laboratorios de investigación

El colorante primario busca teñir una estructura en especifica de la célula

Ejemplo:

-Endo esporas

-Flagelos

-ADN