Bioq. sanguinea

Bioquímica sanguínea

Indicar al paciente: Tener un ayuno de 10 a 12 h; evitar hacer ejercicio, fumar o beber previo a la toma

de muestra.

Para tomar la muestra, realizar punción venosa con tubo al vacío de tapón rojo o dorado, protegido de la luz

Trasvasar el suero obtenido a un tubo protegido de la luz, con una pipeta Pasteur,

evitando la formación de burbujas y la hemólisis.

Encender el espectrofotómetro

Preparar blancos, soluciones patrón y muestras problema de acuerdo al manual de uso del reactivo o a como lo indiquen los profesores.

Mezclar disoluciones en vortex

Rotular tubos de ensaye con el nombre de cada analito a cuantificar y la solución correspondiente de cada uno de ellos (Muestra problema, Patrón y Blanco

Ajustar el espectrofotómetro con el blanco (correspondiente de cada analito) a cero de absorbancia antes de comenzar la lectura de la solución patrón y la mta. problema de cada analito

Determinación de bilirrubinas

Obtener suero

Dejar reposar el tubo al vacío con la muestra durante 30 min para promover formación del coagulo

Introducir tubo etiquetado y tapado con papel parafilm a la centrifuga. Centrifugar a 2500 rpm x 10 min

Leer la absorbancia de la sol. pt y la mta. prob, tanto de la bilirrubina directa como la bilirrubina total, en los tiempos indicados en el manual de uso del reactivo a 520-580 nm

Determinación de lípidos totales

Cuantificación de TAG

Determinación de colesterol

Cuantificación de proteínas totales

Cuantificación de albúmina

Determinación de relación Albúmina/Globulinas (A/G)

Realizar los cálculos necesarios para obtener las concentraciones de bilirrubinas en la

muestra, pueden considerarse las siguientes fórmulas

Bilirrubina Total (BT) = (Abs BT – Abs Blanco Total) x factor

Bilirrubina Directa (BD) = (Abs BD – Abs Blanco Directa) x factor

Bilirrubina Indirecta = Bilirrubina Total – Bilirrubina Directa

Colocar 200 mL de agua corriente en un vaso de precipitados de 500 mL con 20 perlas

de vidrio y ponerla a ebullición.

Cubrir los tubos correspondientes con un tapón de goma.

- Cuando el agua esté bullendo suavemente, colocar los tubos dentro del vaso durante

10 minutos para que se lleve a cabo la hidrólisis.

Retirar los tubos de la ebullición, dejar enfriar ligeramente y sumergirlos en baño de

agua fría para enfriamiento total (hidrolizado)

Seleccionar la longitud de onda 505 nm en el espectrofotómetro

Rotular un tubo como "muestra hidrolizado".

Para el caso de lípidos totales: rotular un tubo como muestra 1.

- Preparar los tubos marcados de acuerdo con las indicaciones del manual de uso del

reactivo para la primera etapa (preparación del hidrolizado)

El profesor responsable de la sesión indicará los equipos que prepararán los tubos

blanco y patrón.

- Prepararlos de acuerdo con las indicaciones del manual de uso del reactivo.

Mezclar e incubar los tubos 15 min a 37 oC.

Leer las absorbancias de los tubos patrón y muestra y anotarlas

Sustituir los valores obtenidos en la siguiente fórmula para obtener la concentración de

proteínas en la muestra:

(Abs Mta/ Abs Pt) X Conc Pt = Conc Mta

Seleccionar la longitud de onda 505 nm

Seleccionar la longitud de onda: 505 nm

Mezclar e incubar los tubos: 5 minutos a 37 oC.

Seleccionar la longitud de onda: 540 nm.

Leer las absorbancias de los tubos patrón y muestra.

Sustituir los valores obtenidos en la siguiente fórmula para obtener la concentración de

proteínas en la muestra:

(Abs Mta/ Abs Pt) X Conc Pt = Conc Mta

Seleccionar la longitud de onda: 630 nm.

Obtener la concentración de globulinas despejándolas de la siguiente fórmula

Conc Proteínas totales = Conc Albúmina + Conc Globulinas

Sustituir los valores obtenidos en la siguiente fórmula:

Concentración de Albúmina/Concentración de Globulinas = Relación A/G

Registrar resultados obtenidos en el reporte correspondiente