Flowchart
Ejercicio_3_Bioquimica_Tarea 3
Flowchart content
Inhibición de estrés oxidativo
Efecto Citoprotector
Grado de Hidrólisis y actividad antioxidante (Métodos Químicos)
Grado de Hidrólisis y actividad antioxidante (Métodos con Células)
Hidrólisis enzimática
Pretratamiento de Hoja de yuca
Materia prima
Purificación por Ultrafiltración
Purificación por Hidrofobicidad
Purificación por HPLC
Residuos Agroindustriales
El 17% de este tipo de residuos son aprovechables, en este caso se usa la Hoja de yuca.
Alto contenido de Proteína y aminoacidos esenciales
Se lavan y muelen o trituran.
Se realiza tratamiento térmico por 5 min, para eliminar compuestos cianogénicos.
Posteriormente, se seca, se muele y se tamiza.
Se realiza en un reactor, con la enzima Alcalasa 2,4L.
Parámetros de trabajo pH=10, T=60°C y relación (E/S)= 0.015 EU/mL. Durante 6 horas.
Obtención de péptidos funcionales.
Realizado en células vasculares de músculo liso.
Posteriormente , se realiza ensayo de citotoxicidad
Con el fin de detectar si el hidrolizado afecta negativamente a las células en estudio.
Tratar las células con el hidrolizado y luego estresarlas con ANG II
Posteriormente, se les pone colorante fluorecente.
las células al ser estresada generan ROS, y este genera fluorecencia
El hidrolizado puede inhibir el estrés de las células.
GH al rededor del 25% tuvo una mayor actividad antioxidante.
Por temas económicos y de proceso, se decide trabajar con solo 2 horas de reacción.
Esto debido a que se obtuvo mayor actividad antioxidante, según los métodos químicos.
Por medio de la fluorescencia de las células
Se determina la inhibición del estrés oxidativo en las celulas, gracias a la presencia de peptidos del hidrolizado.
Se obtuvo una inhibición del estrés oxidativo alrededor del 50% con una concentración de 0.1mg/mL.
Separación de péptidos por tamaño molecular
Con membranas de corte de: 100 kDa, 10 KDa y 3 KDa.
Se obtuvieron 4 fracciones: 1) >100KDa 2) 100-10 KDa 3) 10-3 KDa 4) < 3 KDa
Los péptidos con mayor actividad antioxidante son: 10-3 KDa < 3 KDa
Esto debido que algunas proteínas o aminoácidos tiene diferentes grado de hidrofobicidad.
Los péptidos de mayor hidrofobicidad tienen mayor poder antioxidante.
Ofrece una cromatografía que caracteriza los péptidos.
Identifica por medio de graficas el porcetaje obtenido de los diferentes péptidos obtenidos.
Separación por SPE
Medir la actividad antioxidante en las fracciones obtenidas
En la F3-3 es donde se presenta mayor actividad, mediante los métodos químicos.
En la medida en las células no se encontró diferencia significativa en F3-1, F3-2 y F3-3
Análisis LC-MS/MS
Se escogieron las muestras con mayor actividad antioxidante.
Se identificaron que tipo de péptidos por medio del análisis LC-MS/MS
Se obtuvieron 11 secuencias de péptidos bioactivos, que poseen la capacidad de inhibir el estrés oxidativo en las celulas evaluadas.
Evaluación de la actividad antioxidante y la inhibición del estrés oxidativo de Hidrolizado de Hoja de Yuca
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA PARA OBTENCIÓN DE PÉPTIDOS CON ACTIVIDAD FUNCIONAL
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- Flowchart on Ejercicio_3_Bioquimica_Tarea 3, created by Cristian Alvarez on 23/10/2024.
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- Cristian Alvarez
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