Técnicas de Dx para el Cáncer

¿Qué es citogenética? Parte de la genética que estudia los cromosomas y las enfermedades relacionadas causadas por un número o una estructura anormales de los mismos.
1. CITOGENÉTICA MOLECULAR
  1. Uso de técnicas (FISH), en las que las sondas de DNA se marcan con diferentes marcadores fluorescentes de colores para visualizar una o más regiones específicas del genoma. También se puede usar para detectar alteraciones genéticas en poblaciones de células que no se dividen.
    1. 1. Metodología
      1. -Incluye cinco pasos:
        1) pretratamiento de la muestra
        2) desnaturalización de la sonda y muestra
        3) hibridación de la sonda con las células diana.,
        4) lavado posterior a la hibridación,
        5) detección usando un microscopio de epifluorescencia simple con conjuntos de filtros apropiados.
    2. 2. Selección de sondas FISH para su uso en oncología
      1. Hay tres tipos amplios de sondas FISH utilizadas en los laboratorios de genética clínica, cada una con una aplicación diferente:
        Las sondas WCP están diseñadas para marcar todo el cromosoma de interés y son útiles para descifrar aberraciones citogenéticas que son difíciles de resolver por motivos morfológicos.
        Las sondas de enumeración centroméricas (CEP) se hibridan con secuencias de repetición satelital alfa (o beta) dentro de las regiones centroamericanas específicas de cada cromosoma y se usan para la enumeración cromosómica.
        Hay dos sistemas principales de sondas LSI FISH para la detección de reordenamientos génicos en oncología, sondas de translocación de dos colores y sonda de separación de dos colores que involucran genes asociados conocidos, como BCR-ABL1
        2) sondas de secuencia repetitivas para la enumeración de cromosomas [21, 25, 26, 49-51];
        3) sondas de identificador específico de locus (LSI) para fusiones de genes [17, 33, 52], deleciones de genes [35, 53, 54] o duplicaciones [55].
        1) sondas de pintura de cromosomas completos (WCP) para descifrar las aberraciones citogenéticas [8, 34, 47, 48].
    3. 3. Avances en la tecnología FISH
      1. -Se iniciaron a principios de la década de 1990
        -Avances metodológicos en la tecnología citogenética molecular se iniciaron a principios de la década de 1990
        Hibridación genómica comparativa (CGH)
        El CGH puede usarse para detectar desequilibrios genéticos en genomas de prueba y para determinar las posiciones del mapa cromosómico de las ganancias y pérdidas de cromosomas enteros o subregiones
        Cariotipo espectral (SKY)
        Multicolor FISH (MFISH)
        Bandas multicolor (mBAND)
        mBAND ha sido desarrollado para facilitar la identificación de reordenamientos intracromosómicos y mapear el punto de ruptura exacto
2. CITOGENÉTICA CONVENCIONAL
  1. El análisis cromosómico es una técnica simple que requiere de cinco pasos:
    1. 1) cultivo celular
      1. 2) cosecha de cromosomas en metafase.
        3) preparación de cromosomas,.
        4) bandas y tinción usando un protocolo especial,
        5) análisis mediante microscopía óptica o análisis computarizado asistido por cariotipo
  2. Visión general de todas las aberraciones cromosómicas en una sola célula tumoral.
    1. 1. Consideraciones tecnológicas
      1. -Los resultados siempre son impredecibles, por lo tanto no hay una sola técnica que garantiza funcionar.
        -Establecer un cultivo de células de suspensión de médula ósea de neoplasmas hematológicos.
        -Se requiere una biopsias de los ganglios linfáticos.
        -La duración del ciclo celular en las células malignas varía mucho entre los pacientes.
        -Para obtener un resultado exitoso es establecer cultivos múltiples para maximizar las posibilidades de obtener divisiones óptimas de células malignas:
        1) cosecha directa de células de médula ósea
        2) cultivo durante la noche,
        3) excedente cultivo nocturno con sincronización bloqueando en la fase S del ciclo celular.
    2. 2.- Clones anormales adquiridos V.S heteromorfismos citogenéticos
      1. -En el análisis citogenético revela solo metafases anormales, especialmente en aquellos con una translocación equilibrada, puede ser necesario descartar una anomalía cromosómica constitucional
        -La inversión pericéntrica constitucional del cromosoma 9 ocurre en el 0.8% al 2% de la población normal ni aumenta el riesgo de malignidad hematológica.
        - La trisomía 21 es la segunda trisomía más común en AML y MDS después del trisodio 8.
    3. 3. Mecanismos que generan anormalidades cromosómicas
      1. 1) Ganancia neta y pérdida de material cromosómico
      2. 2) Reordenamientos cromosómicos
3. PERSPECTIVAS FUTURAS Y OBSERVACIONES FINALES
  1. El uso de técnicas avanzadas de FISH permite la identificación de alteraciones cromosómicas que no se resuelven mediante cariotipo.
    1. La citogenética actúa como una guía para identificar los genes responsables del desarrollo de estos estados neoplásicos.
      1. Las características únicas de los ácidos nucleicos peptídicos (PNA) permiten el uso de sondas más cortas, permitiendo a su vez que las sondas PNA atraviesen más fácilmente el núcleo.
        Se puede lograr una eficacia de tinción de casi el 100% mediante el uso de sondas de telómeros basadas en PNA.

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