PCR

PCR

1. TECNICA IN VITRO DE AMPLIFICACION QUE PERMITE OBETENER MUCHAS COPIAS IGUALES DE UN FRAGMENTO CONCRETO DE ADN, PARTIENDO DE UN MOLDE DE ÉSTE.

   • Amplificar varios fragmentos distintos en una clonación
   • Amplificar fragmentos de ARN
   • Cuantificar concentraciones de ácidos nucleicos de una muestra

2. CICLO BÁSICO

   • FASE I. DESNATURALIZACION DE ADN
   • TIPO II. HIBRIDACIÓN
   • TIPO III. EXTENSIÓN

3. TIPOS DE PCR

   • PCR CONVENCIONAL
     • TIPOS DE PCR CONVENCIONAL
       • PCR CON INICIO EN CALIENTE
       • PCR EN GRANDES FRAGMENTOS
       • PCR DE ALTA FIDELIDAD
     • Técnica simple. Sólo se multiplica un único fragmento de ADN con un único par de cebadores y en un único proceso de amplificación real.
       • MEZCLA DE REACCÓN: cloruro magnésico, dexosinucleotidos trifosfato, cebadores, ADN polimerasa, ADN molde
   • OTROS TIPOS DE PCR
     • PCR ANIDADA
       • Realización de 2 reacciones de PCR acopladas, de manera que la segunda utiliza como ADN molde, los productos de amplificación de la primera
     • PCR MÚLTIPLE
       • Amplificación de varias secuencias diana simultáneamente, en una sola reacción gracias a la utilización de diferentes cebadores.
     • PCR A TIEMPO REAL
       • Monitorización del proceso de amplificación, mediante el empleo de productos fluorescentes, de manera que la detección de las amplificaciones se realiza ciclo a ciclo
         • VENTAJAS: mayor rapidez de detección, resultados objetivos, menor contaminación

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