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Identificación
bacteriana mediante
MALDI-TOF.
- Objetivo
- Identificar organismos bacterianos
mediante el análisis proteico por
MALDI-TOF comparada con los métodos de
pruebas bioquímicas utilizados
comúnmente.
- Identificar organismos bacterianos
mediante el análisis proteico por
MALDI-TOF comparada con los métodos de
pruebas bioquímicas utilizados
comúnmente.
- Métodología
- 294 análisis aeorobios y
anaerobios facultativos durante 2
semanas de exudades vaginales,
faríngeos, hemocultivos, etc
- Cultivados en agar sangre,agar
chocolate,agar McConkey y agarchocolate
bacitracina a 37°C en atmósfera aerobia o
10% de dióxido de carbono
- Se identificaron
por pruebas
bioquímicas
encontrando
Gram+ y Gram-
- MALDI-TOF
- Preparación de muestras: Una colonia
colocada en la película del
espectrofotómetro de masas con una
solución de la matriz: de ácido
alfa-ciano-4-hidroxicinámico en
acetonitrilo al 50% y ácido
trifluoroacético al 2,5%)
- Condiciones del MS: Se obtuvo
elespectroentre 2–20kD
deforma automática. Modo
lineal positivo y 200Hz de
frecuencia usando el equipo
MALDI-TOF-TOF AutoflexIII y la
base de datos MALDI Biotyper
- Análisis: Se proceso el espectro con
MOs problema el MALDI- Biotyper 1.1 y
se comparó con el 2.0 de referencia por
el algoritmo del equipo y sin
intervención del usuario.
- Valoración de
resultados; Buena el
perfil de comparación
entre el software y el MO
problema >=2, probable
entre >=1.5 y <2 y no
fiable <1.5
- Preparación de muestras: Una colonia
colocada en la película del
espectrofotómetro de masas con una
solución de la matriz: de ácido
alfa-ciano-4-hidroxicinámico en
acetonitrilo al 50% y ácido
trifluoroacético al 2,5%)
- Se identificaron
por pruebas
bioquímicas
encontrando
Gram+ y Gram-
- Cultivados en agar sangre,agar
chocolate,agar McConkey y agarchocolate
bacitracina a 37°C en atmósfera aerobia o
10% de dióxido de carbono
- 294 análisis aeorobios y
anaerobios facultativos durante 2
semanas de exudades vaginales,
faríngeos, hemocultivos, etc
- Resultados y
Discusión de
resultados
- Para el caso de Gram+ todas resultaron
ser las mismas identificadas por ambos
métodos como se muestra en la tabla de
arriba.
- En el caso de Gram-, hubo mayor
discrepancia ya que en algunos casos el género
era el que se identificaba , no la especie y en
otros ni siquiera el género tal como se muestra arriba.
- Para el caso de Gram+ todas resultaron
ser las mismas identificadas por ambos
métodos como se muestra en la tabla de
arriba.
- Conclusión
- Es confiable
ya que en su
mayoría se
obtuvieron
muy buenos
resultados,
sencillo y
veloz.
- Sin embargo no es tan sensible y la
cantidad de MOs obtenidas de la
muestras pueden ser insuficientes
para este método aunque también
hay muestras proteicas de origen
humano que pueden interferir
- Por tanto, sólo algunos tipos de
muestras son útiles ya que permiten
obtener gran volumen, son
monobacterianas y hay pocas
proteínas humanas son utilizables
como el caso de la orina.
- Es confiable
ya que en su
mayoría se
obtuvieron
muy buenos
resultados,
sencillo y
veloz.
- Fundamento MALDI-TOF
- Las muestras se depositan sobre un
sustrato metálico capaz de contener entre
uno y varios cientos de puntos de analito.
Estas manchas son luego irradiados por un
pulso de láser, para generar una corta
ráfaga de iones. Los iones son acelerados a
una cantidad fija de energía cinética y
descienden por un tubo de vuelo. Los iones
pequeños tienen una mayor velocidad y se
registran en un detector antes que los más
grandes, produciendo el (TOF) espectro de
tiempo de vuelo
- Las muestras se depositan sobre un
sustrato metálico capaz de contener entre
uno y varios cientos de puntos de analito.
Estas manchas son luego irradiados por un
pulso de láser, para generar una corta
ráfaga de iones. Los iones son acelerados a
una cantidad fija de energía cinética y
descienden por un tubo de vuelo. Los iones
pequeños tienen una mayor velocidad y se
registran en un detector antes que los más
grandes, produciendo el (TOF) espectro de
tiempo de vuelo
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