Identificación bacteriana mediante MALDI-TOF.

Identificación bacteriana mediante MALDI-TOF.

1. Objetivo

   • Identificar organismos bacterianos mediante el análisis proteico por MALDI-TOF comparada con los métodos de pruebas bioquímicas utilizados comúnmente.

2. Métodología

   • 294 análisis aeorobios y anaerobios facultativos durante 2 semanas de exudades vaginales, faríngeos, hemocultivos, etc
     • Cultivados en agar sangre,agar chocolate,agar McConkey y agarchocolate bacitracina a 37°C en atmósfera aerobia o 10% de dióxido de carbono
       • Se identificaron por pruebas bioquímicas encontrando Gram+ y Gram-
       • MALDI-TOF
         • Preparación de muestras: Una colonia colocada en la película del espectrofotómetro de masas con una solución de la matriz: de ácido alfa-ciano-4-hidroxicinámico en acetonitrilo al 50% y ácido trifluoroacético al 2,5%)
         • Condiciones del MS: Se obtuvo elespectroentre 2–20kD deforma automática. Modo lineal positivo y 200Hz de frecuencia usando el equipo MALDI-TOF-TOF AutoflexIII y la base de datos MALDI Biotyper
         • Análisis: Se proceso el espectro con MOs problema el MALDI- Biotyper 1.1 y se comparó con el 2.0 de referencia por el algoritmo del equipo y sin intervención del usuario.
         • Valoración de resultados; Buena el perfil de comparación entre el software y el MO problema >=2, probable entre >=1.5 y <2 y no fiable <1.5

3. Resultados y Discusión de resultados

   • Para el caso de Gram+ todas resultaron ser las mismas identificadas por ambos métodos como se muestra en la tabla de arriba.
   • En el caso de Gram-, hubo mayor discrepancia ya que en algunos casos el género era el que se identificaba , no la especie y en otros ni siquiera el género tal como se muestra arriba.

4. Conclusión

   • Es confiable ya que en su mayoría se obtuvieron muy buenos resultados, sencillo y veloz.
   • Sin embargo no es tan sensible y la cantidad de MOs obtenidas de la muestras pueden ser insuficientes para este método aunque también hay muestras proteicas de origen humano que pueden interferir
   • Por tanto, sólo algunos tipos de muestras son útiles ya que permiten obtener gran volumen, son monobacterianas y hay pocas proteínas humanas son utilizables como el caso de la orina.

5. Fundamento MALDI-TOF

   • Las muestras se depositan sobre un sustrato metálico capaz de contener entre uno y varios cientos de puntos de analito. Estas manchas son luego irradiados por un pulso de láser, para generar una corta ráfaga de iones. Los iones son acelerados a una cantidad fija de energía cinética y descienden por un tubo de vuelo. Los iones pequeños tienen una mayor velocidad y se registran en un detector antes que los más grandes, produciendo el (TOF) espectro de tiempo de vuelo

Images and files in the map