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SUSTANCIAS FIJADORAS SIN FORMOL

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SUSTANCIAS FIJADORAS SIN FORMOL
  1. Fijador de Zirkle Los tejidos fijados con fijadores básicos muestran preservación preferente de mitocondrias, núcleo, y (algunas veces) vacuolas, con el mantenimiento del citoplasma mayoritariamente disuelto. La cromatina y "spindles" son también disueltos. Se trata de un fijador bastante satisfactorio, dentro de los pocos que hay Dicromato potásico------2.5 g Dicromato amónico------2.5 g Sulfato cúprico----------2.0 g Agua destilanda-------400 ml Fijar 24-48 horas, lavar con agua, deshidratar e imbibir en parafina.
    1. Fijador de Carnoy El fijador de Carnoy es un fijador que contiene cloroformo. Penetra en tejidos extremadamente rápido y pude fijar piezas de tejido de pequeño tamaño en minutos en vez de las horas requeridas con otros fijadores. Los tejidos delicados pueden ser dañados cuando se transiferen de soluciones acuosas a este fijador, debido a la extrema hidrofobicidad del cloroformo y resultando en una deshidratación rápida de los tejidos. Reservar el fijador de Carnoy para muestras más fuertes. Este fijador ha sido usado tradicionalmente para estructuras citológicas. Etanol absoluto---------60 ml Ácido acético glacila----10 ml Cloroformo-------------30 ml Fija piezas de tejido de pequeño tamaño aproximadamente en 1 hora, lavar varias veces en alcohol absoluto, infiltrar e incrustar.
      1. Acético-ósmico-dicromato Se trata de un fijador básico que preserva principalmente mitocondrias, núcleo y algunas veces vacuolas. Enviado por Emmel y Cowdry, este fijador es excelente para mitocondrias. Debido a la presencia de ácido ósmico, la penetración en los tejidos es lenta y no extensiva; por eso se deben usar muestras pequeñas. Dicromato potásico (2.5% acuoso) ---8 ml Ácido ósmico (2% acuoso) -----------2ml Ácido acético glacial------------- una gota Fijar muestras pequeñas durante 24-48 horas, lavar en agua, deshidratar e inhibir en parafina.
        1. Acido crómico. Se utiliza en soluciones al 2%. Hay que tener precaución al usarlo, puesto que disuelve las láminas medias y las celulosas. Después de una fijación de 1-2 horas, se debe sacar la muestra del mismo y pasarla a un conservador. Es un buen fijador si se toman las precauciones debidas. El ácido crómico como fijador es el más usado en investigación citológica. Es un oxidante fuerte y fijador coagulante y resulta en una fijación ácida mostrando buena preservación de los ácidos nucleicos y proteínas. Las sales de cromo se disocian en soluciones acuosas formando complejos Cr-O-Cr, que reaccionan tanto con lípidos como con proteínas.
          1. Acroleína La acroleína es un fijador que penetra rápidamente en los tejidos y es muy bueno para fijar tejidos delicados y preservar vacuolas y orgánulos subcelulares. Generalmente la acroleina se reserva para métodos preparatorios que utilizan como medio de imbibición plásticos, ya que las estructuras finas preservadas son retenidas pobremente por la parafina. La acroleína es inestable a la luz y a pH elevado, formando un disacril sólido.
            1. Carmín acético hidrato de cloral. Se trata de un fijador y colorante al mismo tiempo para la tinción de protalos de helechos. La siguiente formulación está preparada para 200 ml de fijador.
              1. Etanol-Glicerina-Agua o Alcohol-Glicerina-Agua (G.A.W.) Alcohol 96º-----1/3 Glicerina--------1/3 Agua destilada--1/3 Fijador lento y conservador perecedero, máximo dos años de permanencia en la solución. No endurece; para cortar por congelación debe lavarse la muestra en agua destilada un mínimo de cuatro horas.
                1. Fijador de Chamberlain Es un fijador de ácido crómico que ha mostrado ser útil para fijar tejidos delicados y para trabajo con embriones. La formulacion "débil" debe ser usada para meristemos de tallos y raíces, ovarios u óvulos aislados. La formulación "fuerte" ha sido utilizada con éxito para la preservación de musgos, algas, y hongos. Fija muestras de tejido muy pequeña en 24-48 horas, lavar con agua destilada y proceder a la realización de sercciones.
                  1. Fijador de Farmer El fluido de Farmer es una solución fijadora anhidro que causa rápida deshidratación y fijación. Como con el fijador de Carnoy, el rápido cambio de agua en el tejido puede causar graves alteraciones en los tejidos. Sin embargo estos dos fijadores son excelentes para investigación citológica.
                    1. Fijación fase partida Un método de fijación diferente es la fijación en fase partida. En este método el fijador acuoso se mezcla con un disolvente orgánico, generalmente heptano, agitado, y usado inmediatamente.
                      1. Metanol-ácido acético (MAA) Las anteras han sido fijadas con éxito para la investigación de cromosomas meióticos en estado paquiteno usando metanol-ácido acético. Quitar las anteras de los brotes florales seccionando en tampón citrato (citrato sódico 0.01 M, pH 4.6). Fijar las anteras en MAA reciente a -20ºC (3:1).
                        1. Mezcla Cromo-Acética. Para preparar 100 ml. a) Débil: Anhidrido crómico, solución acuosa al 10%-----------2,5 ml. Ácido acético al 10%-----------------------------------5 ml. Agua destilada---------------------------------------72,5 ml. Fijador para Algas filamentosas, Hongos y Briofitos.
                          1. Solución de Flemming La solución de Flemming es un buen fijador citológico que contiene el cromo como agente coagulante y el fijador aditivo tetróxido de osmio. La fijación con tetróxido de osmio se retringe a las paredes celulares exteriores debito a su baja tasa de penetración en tejidos, mientras que el ácido acético entra concienzudamente en los tejidos. Por tanto, este es el mejor uso de la solución de Flemming sobre muestras de tejido de tamaño pequeño.
                            1. Teróxido de osmio Aunque no es un fijador común para microscopía de campo claro, el tetróxido de osmio tiene un entrecruzamiento extermadamente útil, fijador aditivo para estabilizar lípidos y por tanto la estructura de membranas.
                              1. Acetona La Acetona se fabrica principalmente mediante los procesos de peroxidación del Cumeno o la deshidrogenación del Alcohol Isopropílico (2 – Propanol).
                                1. Bicloruro de mercurio: Su fórmula química es Cl2Hg y se lo emplea, generalmente, en solución acuosa al 5%. Esta solución tiene un pH aproximado a 3.0 y su potencial de oxidación es 0,75 volt. El Hg es un metal bivalente que se adiciona a sitios insaturados de lípidos y a puentes disulfuros en proteínas con gran especificidad, provocando la preservación de estos componentes tisulares
                                  1. Dicromato de potasio: Se lo utiliza en solución acuosa al 1,5% y su fórmula molecular es Cr2O7K2. A esa concentración tiene un pH de 3,9 y su potencial de oxidación en moderado (0,79 volt.). Durante su disolución origina los aniones dicromato y cromato hidrogenado, los cuales permiten la correcta preservación de lípidos y proteínas respectivamente. Penetra lentamente otorgando al tejido una rigidez que favorece el seccionamiento con micrótomo. Las proteínas se fijan por coagulación, los ácidos nucleicos tienden a disolverse; mientras que las histonas nucleares son fuertemente gelatinizadas. En el caso de los lípidos son atacados por sus dobles ligaduras y los vuelve más resistentes a los solventes orgánicos.
                                    1. Acido crómico: Se lo emplea en bajas concentraciones (0,5%). Su fórmula química es CrO3 y su potencial de oxidación es 1,08 volt. Se lo recomienda para preservar lípidos, ya que actúa de la misma forma que el dicromato de potasio
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