Fixação histológica

Fixação histológica

1. microscópio optico ou de luz

   • incidencia feixe luz sobre a lamina (atravessa)
     • tecidos e orgãos espessos
       • necessário corte histológico
         • antes: processo tratamento
         • c/ micrótomos

2. 1° FIXAÇÃO

   • logo após remoção do corpo
   • objetivo
     • evitar autólise ou digestão p bactérias
     • endurecer fragmentos
     • preservar estrutura e composição molecular dos tecidos
   • métodos
     • químicos
       • fixadores
         • ag. desnaturantes
         • agentes estabilizantes
           • formam pontes c moléculas adjacentes
         • modo
           • perfusão intervascular
           • ou corte em fragmentos menor
         • mais comuns
           • solução formaldeido 4%
           • glutaraldeído
             • microscópio eletrônico
               • maior cuidado fixação
                 • dose fixação dupla
                   • 1° glutaraldeido tamponado
                   • seguido: tetróxido de ósmio
                     • contraste lipídios e proteínas
             • torna mais eficiente form. lig. cruzada proteínas
           • esses dois reagem grupo amina
     • físicos

3. iINCLUSÃO

   • para corte com micrótomo
     • antes tornar fragmento rigido
       • pós fixação
   • subst. utilizadas
     • parafinas
       • microscópio óptico
     • resinas de plástico
       • óptico e eletrônico
   • processo impregnar c/ parafina
   • etapas
     • desidratação
       • água tecidual extraida
         • soluções conc crescentes etanol
     • clareamento
       • pós desidratação
         • etanol substituido substancia intermediária
           • solúvel tanto em agua quanto no meio escolhido (parafina ou resíduo)
           • em geral solvente orgânico
             • mais comuns
               • xilol
               • toluol
             • após tecidos serem embebidos
               • ficam translúcidos
                 • colocados parafina derretida (56-60°)
                   • calor= evaporação solvente orgânico
                     • espaços nos frag. tecidos preenchidos c/ parafina
                       • sai da estufa
                         • parafina solidifica
                           • rigidos
                             • vão pro micrótomo
                               • lamina aço ou vidro
                                 • fornecer cortes 1-10 micrometros
                                   • depois colocados flutuar agua aquecida
                                     • depois sobre laminas de vidro
                                       • aderem
                                         • vão ser corados

4. fixação por congelação

   • congelamento
     • tornam-se rigidos
       • micrótomo
         • criostato ou criomicrótomo
     • usado quando é necessário rapidez
       • centro cirúrgico
       • tbm caso enzimas já que ao contrario fixação quimica, não inativa enzima
         • mantém conformação
       • para lipidios tbm
         • pq solventes orgânicos como xilol os dissolvem

5. 3-COLORAÇÃO

   • tecidos são incolores(exceções)
   • evidenciar componentes
   • seletividade maior ou menor
   • caráter acido ou básico
     • formam ligações salinas/ eletroestaticas com componentes teciduais ionizados
       • exemplos corantes básicos
         • azul de toluidina
         • azul de metileno
         • hematoxilina
         • reagem estruturas basófilas dos tecidos
           • geralmente contém algum acido na sua estrutura
             • acidos nucleicos
             • glicoproteinas acidas
             • glicosaminoglicanos
       • corantes ácidos
         • orange G
         • eosina
         • fucsina ácida
         • coram componentes acidófilos
           • mitocôndrias
           • proteínas citoplasmaticas
           • colágeno
           • grânulos de secreção
   • corantes mais utilizados
     • hematoxilina
       • cora azul e violeta estruturas acidas
         • parte citosol rica rna
         • MEC da cartilagem hialina
     • eosina
       • cora cor-de-rosa
         • citoplasma
         • colágeno
     • tricômicos
       • citoplasma, nucleo, diferença colágeno e musc. liso
         • observar colágeno
           • picrosirius associado a luz polarizada
   • contracorante
   • impregnação por metais
     • sist. nervoso

6. 12h a 2 dias