Tinción de Gram

Tinción de Gram

1. Tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.

2. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana

   • Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra.
     • Considerándose
       • Gram positivas
         • Pared celular gruesa, que contiene un gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram.
         • Son de color violeta intenso
       • Gram negativas
         • Tiene también una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram)
           • Son de color Fucsia
         • Pared fina formada por menos capas de peptidoglicano

3. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884

4. Procedimiento

   • 1. Recoger muestras para ubicarlas en el microscopio.
     • 2.Hacer el extendido con un palillo de madera.
       • 3. Dejar secar a temperatura ambiente y fijarlas utilizando un mechero.
         • 4. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente).
           • 5. Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.
             • 6. Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra.
               • 7. Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
                 • 8. Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del reactivo (parte crítica de la coloración). (las gram - se decoloran, las gram + no) Enjuagar con agua.
                   • 9. Enjuagar con agua
                     • 10. Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.
                       • 11. Lavar levemente con agua.

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