Extração de beta-glucano

Extração de beta-glucano

1. Extração da parede celular

   • Suspensão de 2 kg de levedura em 8 L de água destilada a 5°C
     • Tratamento em moinho mecânico com pérolas de vidro de 0,02-0,05 mm de diâmetro com fluxo de 80 mL/min a 2500 rpm
       • Centrifugação a 12.300G por 15 min a 5°C
         • Lavagem do precipitado até o sobrenadante ficar límpido
           • Liofilização
             • Extração de lipídeos com solução de hexano e metanol na proporção de 4:1 por 30 min
   • Primeira etapa
   • Suspensão de parede celular desengordurada 5% (m/v) em tampão fosfato 50 mM pH 7,0
     • Segunda etapa
     • Tratamento em autoclave por 2 h a 121 °C
       • Resfriamento
         • Centrifugação da suspensão a 10.000G por 15 min a 5°C
           • Sobrenadante (manana-proteína)
           • Precipitado (glucana bruta)
             • Lavagem dupla com a mesma solução tampão
               • Liofilização
     • Suspensão de 5% de glucana bruta liofilizada em solução tampão fosfato 50 mM pH 8,0 e solução enzimática incubada a 50°C por 5 h com agitação mecãnica em intervalos regulares
       • Aquecimento em banho de ebulição por 10 min.
         • Separação dos resíduos insolúveis por centrifugação 10.000G por 15 min
           • Lavagem dupla com água destilada
       • Terceira etapa