Células de tabaco transgénicas que producen el anticuerpo monoclonal humano contra el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B

Células de tabaco transgénicas que producen el anticuerpo monoclonal humano contra el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B

1. Introducción

   • La línea celular humana TAPC301-CL4 se originó a partir de líneas de células B transformadas con el virus de Epstein-Barr (EBV)
     • Solo se necesitan sacarosa, minerales y algunas hormonas vegetales para hacer crecer los cultivos de tejidos vegetales.
       • Se clonó el ADNc de todo el CL4MAb y se introdujo en el genoma de cultivos en suspensión de células de tabaco.
         • El CL4MAb se expresó en cultivos de plantas de tabaco, purificando las propiedades y se compararó con las del CL4MAb-l secretado por las células TAPC301-CL4
     • La HBIg también se usa de manera profiláctica para evitarla hepatitis B

2. MATERIALES Y MÉTODOS

   • Construcciones de vectores binarios
     • Se muestran en las series B29, B30 o B31
       • Las células transgénicas se propagaron en tres plásmidos.
         • El p29 contenía las secuencias líderes originales. En el p30, las LS fueron reemplazadas por la codificación de ADN sintetizada y para la secuencia de secreción (SS)
           • Las secuencias de iniciación de la traducción (IS) se cambiaron de GTCGA-CATG a AACAATG para mejorar la expresión de los anticuerpos
             • Finalmente El b-glucuronidase-NosT del vector pBI101 fue sustituido por los cassettes Ab
   • Transformación de la cultura de la suspensión del tabaco
     • Para la transformación se utilizó ElectroMAX TM Agrobacterium tumefaciens Células LBA4404 por electroporación
       • Se seleccionaron células resistentes a la kanamicina en placas de Murashige y Skoog (MS)
         • Estas células Las células transgénicas se propagaron durante 7 días a 268°C en la oscuridad, bajo las mismas condiciones utilizadas para las células BY-2

3. Resultados

   • Generación de células de tabaco transgénico
     • Se obtuvieron tres series de células transgénicas de suspensión de tabaco BY-2
       • Para la prueba ELISA se utilizaron extractos de pequeñas proteínas de cultivos de 7 días
         • El tiempo de la síntesis de anti-HBs se determinó cuantificando las cantidades de proteínas IgG humanas en los extractos totales
           • Los porcentajes de IgG humana en la TSP fueron aproximadamente 0.2% para B29-4, 0.6% para B30-3, y 0.25% para las células B31-7
             • Las células B30-3 crecieron bien y alcanzaron rápidamente la densidad de saturación. Las células B31-7 crecieron lentamente y no alcanzaron la densidad de saturación hasta 10-14 días.
   • Purificación de los anticuerpos a partir de células de tabaco transgénicas
     • Las cantidades de anticuerpos purificados del medio fueron similares entre las líneas celulares B29-4, B30-3 y B31-7
       • La purificación fue de 16,2 mg de IgG humana de 1 L de un cultivo de 10 días de células B30-3.
         • Las bandas principales de cadenas pesadas (H) y ligeras (L) de los MAbs eran casi todas del mismo tamaño.
           • La diferencia entre los tres MAbs era la presencia de bandas de tinción débil entre las posiciones de las cadenas H y L