CROMATOGRAFIA EM COLUNA

CROMATOGRAFIA EM COLUNA

1. A escolha do solvente ou da mistura de solventes utilizados na CC é o ponto crítico da técnica

2. Essas possibilidades analíticas permitem maior rapidez na busca de novas substâncias ativas

3. Pode levar a compostos com alto grau de pureza

4. Realizada através de um tubo vertical com sílica

5. É uma técnica de análise muito usada para separar mistura de substâncias químicas

6. A mistura que se deseja separar é colocada no topo da coluna utilizando o eluente menos polar, no caso da utilização de misturas

   • Forma gradiente ou forma isocrática
   • Os componentes da mistura vão se mover em diferentes velocidades, dependendo da afinidade com a fase móvel ou estacionária.

7. Cromatografia em coluna (CC): é a técnica mais antiga da cromatografia

8. A aplicação serve para separar componentes em duas fases: sólida e líquida

   • Fase sólida: Cromatografia em coluna de sílica (CCS)
     • Os compostos mais apolares passam pela coluna com maior velocidade do que os compostos polares, que tem maior afinidade com a sílica, um composto polar.
   • Os compostos mais apolares passam pela coluna com maior velocidade do que os compostos polares, que tem maior afinidade com a sílica, um composto polar.

9. CROMATOGRAFIA

   • CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)
     • Aplicável para separar e analisar misturas de substancias voláteis com ponto de ebulição ate 300 ºC
     • A amostra é vaporizada e introduzida em um fluxo de um gás adequado denominado de fase móvel (FM) ou gás de arraste
       • Posteriormente esse fluxo de gás com a amostra vaporizada passa por um tubo contendo a fase estacionária FE (coluna cromatográfica), sendo nessa etapa que ocorre a separação da mistura
     • Instrumentação
       • Fonte do gás de arraste
         • Local onde a amostra é introduzida
       • Sistema de injeção da amostra
       • Registrador
       • Amplificador de sinal
       • Sistema de detecção
         • Detector por Captura de Elétrons: supressão de corrente causada pela absorção de elétrons por eluatos altamente eletrofílicos.
         • Detector por Condutividade Térmica: variação da condutividade térmica do gás de arraste
         • Detector por Condutividade Térmica: variação da condutividade térmica do gás de arraste
       • Coluna cromatográfica
         • Coluna cromatográfica
         • Colunas Capilares: maior eficiência e analise mais rapida
     • Duas fases
       • Fase Movél: move sobre a fase estacionária (Argônio, Nitrogênio, Hidrogênio ou Hélio)
       • Fase Estacionária: reside dentro da coluna
         • Podendo ser um: sólido adsorvente (Cromatografia Gás/Sólido), filme de um líquido pouco volátil, suportado sobre um sólido inerte (Cromatografia Gás-Líquido com Coluna Empacotada ou Recheada) ou sobre a própria parede do tubo (Cromatografia Gasosa de Alta Resolução)
     • Dois Fatores definem a separação dos constituintes de uma amostra
       • A volatilidade: quanto mais volátil a substância maior a sua tendência de permanecer vaporizada e mais rapidamente caminha pelo sistema.
       • solubilidade na FE: quanto maior a solubilidade de um constituinte na FE, mais lentamente ele caminha pela coluna.
     • A cromatografia Gás - Líquida (CGL) é usada para separar íons ou moléculas dissolvidas em um solvente
     • A cromatografia Gás - Sólido (CGS) baseia-se na base sólida estacionária, onde a retenção das substâncias analisáveis é a consequência da absorção física
   • CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA
     • Após o desenvolvimento dos cromatogramas, evapora-se os solventes e as placas são reveladas, a fim de tornar visível as substâncias incolores presentes na amostra
       • Revelações são obtidas pelos principais métodos:
         • Químicos (substâncias borrifadas e depois aquecidas)
         • Físicos (Luz UV)
     • Solventes
       • O solvente deve ser escolhido cuidadosamente, considerando a natureza química das moléculas e a polaridade da fase móvel
     • Adsorventes
       • Grande variedade de placas, nas quais são espalhados adsorventes
     • Fases
       • Estacionaria: Adsorção (Sólidos Polares ex:Sílica,Celulose,Alumina...)
       • Móvel: Solvente se espalha sobre a superfície solida Adsorvente
         • Substancias Apolares ex: Hidrocarbonetos, não terão afinidade pelo adsorvente, deslocando-se com a fase móvel
         • Substâncias polares ex: aromáticas, serao retidas pelo adsorvente e não se deslocam
     • Aplicações
       • Analítica ou Preparativa: Dependendo da espessura da camada adsorvente, e da quantidade de amostra a ser analisada
     • Separa misturas por meio de migração diferencial, por uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfície plana
     • Fácil compreensão e execução
     • Separações Rápidas
     • Cromatografia ascendente :A fase móvel sobe por capilaridade
     • Cromatografia Descendente : A parte superior é submersa em fase móvel, e a cuba é fechada. A mancha é colocada na parte superior do papel
     • Cromatografia Circular: Placa na posição horizontal, Amostra depositada no circulo ao redor do centro, no qual aplica-se a fase móvel. As manchas aparecem em circulo concêntricos
     • Método físico químico de separação de misturas
     • Realizado atraves de duas fases, que estao em contato
     • Cromatografia de adsorção
   • CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
     • CLAE
       • SEPARAÇÃO
         • PARTIÇÃO
           • Imiscível (fase estacionária e móvel)
             • Líquido-líquido
               • FE é um solvente que é imobilizado por adsorção.
           • Com fase ligada
             • FE é um composto orgânico imobilizado por ligações químicas.
         • EXCLUSÃO
           • Ocorre por partículas do solvente
             • O fracionamento se baseia no tamanho das moléculas.
         • TROCA DE ÍONS
           • Supressora de eluente
             • Coluna recheada com uma resina trocadora de íons do solvente de eluição para espécies moleculares de ionização limitada.
             • Pode ser aplicada na determinação de:
               • Cátions e ânions.
         • ADSORÇÃO
           • Analitos são adsorvidos sob uma superfície de um sólido polar finamente dividido.
           • Sua separação se dá graças a interação do soluto.
             • Líquido-sólido
     • Aplicação
       • Determinação da porcentagem do produto ativo, na quantificação das impurezas.
       • Purificação de princípios ativos.
       • Alguns exemplos farmacológicos:
         • Antibacterianos; Sedativos; Analgésicos.
     • Equipamentos
       • Cromatografo
       • Computador
       • Detectores
         • Luz UV/IV; Fluorescência; Espectro de massa

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