Polimorfismo Genético: VNTR, STR, SNP E RFLP

Polimorfismo Genético: VNTR, STR, SNP E RFLP

1. Diferenças na sequência de bases sem consequências patológicas diretas

   • Alelo com frequência na população geralmente > a 1%

2. O genoma humano consiste de 3 bilhões de nucleotídeos e informação para um total de aproximadamente 40.000 genes

   • As sequências únicas constituem de 70% à 80% do genoma humano
     • DNA satélite é uma região do mesmo onde há uma tendência de formar bandas satélites em centrifugação de gradiente
       • VNTR: Uma fração de DNA repetido consiste de regiões denominadas minisatélites ou repetição em tandem de número variável (VNTR – “variable number of tandem repeats”)
         • Os VNTRs exibem uma enorme variabilidade e são constituídos de 9 à 100 pares de bases repetidos sequencialmente em loci cromossômicos
           • Primeiras aplicações das sequências VNTR foram nas áreas forense, e no mapeamento do genoma humano
             • Alec Jeffreys 1985- DNA fingerprint ou perfil de DNA
               • • Os marcadores VNTR são analisados através da técnica RFLP (“restriction fragment lenght polymorphism”), a qual é baseada em mutações que alteram sequências no DNA de um indivíduo. • Indivíduos podem ser diferenciados pelo comprimento de sequências VNTR do DNA gerados após a ação de uma enzima de restrição.

3. STR

   • São sequências curtas repetidas em tandem — STR “short tandem repeats” — ou micros-satélites
   • Podem ser analisados após amplificação pela técnica PCR
   • Esta característica permite que amostras com quantidades diminutas de DNA, ou apresentando alto grau de degradação, possam ser tipadas
   • Com o avanço da tecnologia, foram desenvolvidos processos automatizados para análise de loci STR

4. SNP

   • Polimorfismo de nucleotídeo único ou polimorfismo de nucleotídeo simples (em inglês single nucleotide polymorphism; SNP) é uma variação na sequência de DNA que afeta somente uma base (adenina (A), timina (T), citosina (C) ou guanina (G)) na sequência do genoma entre indivíduos de uma espécie ou entre pares de cromossomos de um individuo
   • Portanto, os SNPs são marcadores bialélicos, podendo ser trialélicos (menor frequência)
   • Localização: Íntrons, éxons, regiões intergênicas, promotores ou enhancers
   • Possuem diversas vantagens em relação aos demais marcadores, sendo elas: sua estabilidade, alta frequência e facilidade de automatização
   • Os SNPs constituem 90% de todas as variações genômicas humanas
   • • Os SNPs apresentam baixa taxa de mutação, sendo assim, podem ser utilizados como marcadores genéticos

5. RFLP

   • • O polimorfismo de comprimento de fragmento de limitação (RFLP) é uma técnica inventada em 1984 pelo cientista inglês Alec Jeffreys durante a pesquisa em doenças hereditárias.
   • É usado para a análise de testes padrões originais no DNA fragmentado a fim diferenciar geneticamente os organismos
   • A técnica do RFLP explora estas diferenças em sequências do DNA para reconhecer e estudar a variação intraspecies e interspecies
   • • O RFLP é executado usando-se uma série de etapas esboçadas: Extração do DNA, Fragmentação do DNA, Eletroforese do gel, Visualização das faixas