Proteína Verde Fluorescente (GFP)

Proteína Verde Fluorescente (GFP)

1. Marcador biológico

2. Pigmento fluorescente

3. Não interfere no funcionamento celular

4. Marcador de fármacos

5. Produzida por Escherichia coli melhorada geneticamente

   • 1. FERMENTAÇÃO
     • 2. RECUPERAÇÃO
       • 3. PURIFICAÇÃO
         • Bombeamento do Lisado clarificado de GFP
           • CROMATOGRAFIA
             • Coluna de Troca Iônica
               • Armazenamento do Lisado de GFP
                 • Adição de sulfato de amônio
                   • Coluna de Interação Hidrofóbica
                     • Baixa densidade: descarte
                     • Alta densidade (proteínas)
                       • TFF - FILTRAÇÃO DE FLUXO TANGENCIAL
                         • Membrana de Ultrafiltração
                           • Fluxo se move pelo filtro
                             • Permeado: o que passa pelo filtro (descarte)
                             • Retentado: o que não passa pelo filtro
                               • Diafiltração
                                 • Adição de um novo tampão
                                   • Substituição do antigo tampão pelo novo
                                     • Solução de GTP retida na membrana
                                       • Filtração em filtro de 0,22 mícrons
                                         • Solução de GFP
                                           • Liofilização
                                             • Embalagem
                                               • Proteína Verde Fluorescente (GFP) finalizada
                                   • Descarte do sulfato de amônio
       • Centrifugação do caldo
         • Ressuspensão da massa celular em solução tamponada
           • Centrifugação do caldo
             • Etapa de Lise Celular
               • Celulas ressuspensas
                 • Bombeadas em alta pressão (900 bar) no homogeinizador
                   • Células forçadas a passar por pequenos orifícios
                     • Células se rompem
                       • Proteínas GFP
                         • Centrifugação
                           • Ressuspensão das proteínas em tampão
                             • Centrifugação
                               • Lisado clarificado de GFP
                               • Restos celulares descartados
                           • Restos celulares descartados
                       • Restos celulares descartados
     • Limpeza do reator
       • Adição dos sais
         • Esterilização in situ
           • Adição da glicose
     • Placas com microrganismo retiradas do freezer
       • Pré-inoculação em shaker
         • Inoculação do reator
           • Adição do IPTG (ativador da expressão proteica)
             • Fermentação (aproximadamente 5hs)
               • Resfriamento e armazenamento do caldo

6. Produto intracelular