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PRACTICA No. 3 – ALDEHÍDOS,
CETONAS Y CARBOHIDRATOS
- Parte I Pruebas para el análisis de aldehídos y cetonas
- 1. Formación de
fenilhidrazonas
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia
a analizar y márquelo con el nombre de la misma 2. Adicione
0,5mL o 0,25 g de la sustancia a analizar (en caso de ser
solida añada 1mL de etanol y agite hasta formar una
solución) 3. Adicione a cada tubo 0,5mL de solución de 2,4
dinitro-fenilhidracina 4. Agite fuertemente, registre los
tiempos de aparición de los correspondientes precipitados
hasta un tiempo de máximo 10 minutos. Igualmente registre
los cambios, colores y otros aspectos que considere
convenientes 5. En el informe de laboratorio realice las
reacciones correspondientes.
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia
a analizar y márquelo con el nombre de la misma 2. Adicione
0,5mL o 0,25 g de la sustancia a analizar (en caso de ser
solida añada 1mL de etanol y agite hasta formar una
solución) 3. Adicione a cada tubo 0,5mL de solución de 2,4
dinitro-fenilhidracina 4. Agite fuertemente, registre los
tiempos de aparición de los correspondientes precipitados
hasta un tiempo de máximo 10 minutos. Igualmente registre
los cambios, colores y otros aspectos que considere
convenientes 5. En el informe de laboratorio realice las
reacciones correspondientes.
- 2. Reacciones de oxidación
(diferenciación entre aldehídos y
cetonas)
- a. Ensayo de Fehling 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada
sustancia a analizar y márquelo con el nombre de la misma 2. Adicione
0,5mL o 0,25 g de la sustancia a analizar 3. Añada a cada tubo 0,5mL de
solución de Fehling A y 0,5mL de solución de Fehling B 4. Agite
suavemente, coloque los tubos en un baño de agua hirviendo, durante
unos tres minutos. 5. Un precipitado amarillo naranja de óxido cuproso es
ensayo positivo. Si se ha añadido exceso de reactivo puede aparecer una
coloración verde que se toma también como positivo.
- PRECAUCIONES Otras sustancias orgánicas como las
α–hidroxicetonas dan ensayo positivo. No se debe calentar
demasiado tiempo los tubos ya que las cetonas pueden
oxidarse en las condiciones del ensayo, falseando los
resultados. Los aldehídos aromáticos y los alifáticos que no
tengan hidrógeno en el carbono α no dan precipitado.
- PRECAUCIONES Otras sustancias orgánicas como las
α–hidroxicetonas dan ensayo positivo. No se debe calentar
demasiado tiempo los tubos ya que las cetonas pueden
oxidarse en las condiciones del ensayo, falseando los
resultados. Los aldehídos aromáticos y los alifáticos que no
tengan hidrógeno en el carbono α no dan precipitado.
- b. Ensayo de Benedict 1. Tome un tubo de
ensayo limpio y seco por cada sustancia a
analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia 2.
Adicione 2mL del reactivo de Benedict 3. Caliente
en un baño de agua hirviendo por tres minutos.
4. Observe los resultados y regístrelos.
- c. Ensayo de Tollens 1. Tome un tubo de ensayo limpio y
seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o
0,25g de la sustancia 2. Adicione 2mL del reactivo de
Tollens, agite y deje reposar por 10 minutos. 3. Si luego
de los 10 minutos, no ha ocurrido reacción alguna,
puede calentar en baño maría a 35ºC por cinco minutos.
No olvide controlar la temperatura para que no
reaccionen las cetonas. 4. Registre sus datos 5. Si
aparece un precipitado negro o un espejo de plata se
considera al ensayo positivo.
- NOTA En caso de necesitar preparar el reactivo de Tollens siga el
siguiente procedimiento: En un tubo de ensayo limpio y seco mezcle
1mL de hidróxido de sodio al 5% con 5mL de nitrato de plata al 5%,
agite cuidadosamente y añada gota a gota solución de hidróxido de
amonio 2N hasta disolver todo el precipitado.
- NOTA En caso de necesitar preparar el reactivo de Tollens siga el
siguiente procedimiento: En un tubo de ensayo limpio y seco mezcle
1mL de hidróxido de sodio al 5% con 5mL de nitrato de plata al 5%,
agite cuidadosamente y añada gota a gota solución de hidróxido de
amonio 2N hasta disolver todo el precipitado.
- a. Ensayo de Fehling 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada
sustancia a analizar y márquelo con el nombre de la misma 2. Adicione
0,5mL o 0,25 g de la sustancia a analizar 3. Añada a cada tubo 0,5mL de
solución de Fehling A y 0,5mL de solución de Fehling B 4. Agite
suavemente, coloque los tubos en un baño de agua hirviendo, durante
unos tres minutos. 5. Un precipitado amarillo naranja de óxido cuproso es
ensayo positivo. Si se ha añadido exceso de reactivo puede aparecer una
coloración verde que se toma también como positivo.
- 3. Detección de hidrógenos α
(alfa) - Ensayo del haloformo
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar,
adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia 2. Añada 5mL de dioxano y agite
hasta la disolución de la muestra. 3. Agregue 1mL de hidróxido de sodio
al 10% y solución de yodo – yoduro de potasio hasta mantener exceso
de yodo (aparece coloración oscura). Si hay decoloración con 2mL de la
solución, coloque el tubo en un baño de agua caliente y controle el
ascenso de temperatura con un termómetro hasta 60ºC 4. Añada más
solución de yodo – yoduro hasta que se mantenga el color oscuro
durante dos minutos a la temperatura indicada. 5. Remueva el exceso
de yodo adicionando unas gotas de hidróxido de sodio al 10 % y
agitando. 6. Llene el tubo con agua y deje en reposo por 15 minutos. Un
precipitado amarillo indica la presencia de yodoformo (ensayo positivo).
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar,
adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia 2. Añada 5mL de dioxano y agite
hasta la disolución de la muestra. 3. Agregue 1mL de hidróxido de sodio
al 10% y solución de yodo – yoduro de potasio hasta mantener exceso
de yodo (aparece coloración oscura). Si hay decoloración con 2mL de la
solución, coloque el tubo en un baño de agua caliente y controle el
ascenso de temperatura con un termómetro hasta 60ºC 4. Añada más
solución de yodo – yoduro hasta que se mantenga el color oscuro
durante dos minutos a la temperatura indicada. 5. Remueva el exceso
de yodo adicionando unas gotas de hidróxido de sodio al 10 % y
agitando. 6. Llene el tubo con agua y deje en reposo por 15 minutos. Un
precipitado amarillo indica la presencia de yodoformo (ensayo positivo).
- Parte II
Carbohidratos
- 1. Reacción de
Molisch
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia
a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia 2. Agregue
cuatro gotas de reactivo de Molisch. 3. En otro tubo, coloque
0,5mL de ácido sulfúrico concentrado, incline un poco el tubo
de ensayo, adicionando cuidadosamente la solución del
carbohidrato preparada anteriormente buscando que quede
encima del ácido sulfúrico. 4. El desarrollo de un color
púrpura – violeta en la interfase se toma como positivo.
(Utilizamos ácido sulfúrico concentrado para descomponer el
carbohidrato a furfural o su derivado y reconocerlo con α –
naftol en metanol ya que forma un anillo de color púrpura –
violeta)
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia
a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia 2. Agregue
cuatro gotas de reactivo de Molisch. 3. En otro tubo, coloque
0,5mL de ácido sulfúrico concentrado, incline un poco el tubo
de ensayo, adicionando cuidadosamente la solución del
carbohidrato preparada anteriormente buscando que quede
encima del ácido sulfúrico. 4. El desarrollo de un color
púrpura – violeta en la interfase se toma como positivo.
(Utilizamos ácido sulfúrico concentrado para descomponer el
carbohidrato a furfural o su derivado y reconocerlo con α –
naftol en metanol ya que forma un anillo de color púrpura –
violeta)
- 2. Reacción de
Benedict
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y
seco por cada sustancia a analizar,
adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia 2.
Agregue 0,5mL de reactivo de Benedict.
3. Coloque el tubo en un baño de agua
hirviendo durante tres minutos. 4. No
olvide registrar los resultados obtenidos
5. Un precipitado oscuro es positivo
para carbohidratos reductores. (El
reactivo contiene citrato de cobre en
medio alcalino suave, al reaccionar con
los azúcares reductores da un
precipitado de óxido cuproso)
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y
seco por cada sustancia a analizar,
adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia 2.
Agregue 0,5mL de reactivo de Benedict.
3. Coloque el tubo en un baño de agua
hirviendo durante tres minutos. 4. No
olvide registrar los resultados obtenidos
5. Un precipitado oscuro es positivo
para carbohidratos reductores. (El
reactivo contiene citrato de cobre en
medio alcalino suave, al reaccionar con
los azúcares reductores da un
precipitado de óxido cuproso)
- 3. Reacción del
Lugol
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada
sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la
sustancia 2. Adicione cinco gotas de la solución de
Lugol, observe los cambios que se presentan. 3. Si
no hay color, corresponde a un monosacárido o un
disacárido, si da color azul se tiene almidón. Si el
color es rojo la muestra contiene nitrógeno o es una
eritrodextrina3 4. Registre sus resultados
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada
sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la
sustancia 2. Adicione cinco gotas de la solución de
Lugol, observe los cambios que se presentan. 3. Si
no hay color, corresponde a un monosacárido o un
disacárido, si da color azul se tiene almidón. Si el
color es rojo la muestra contiene nitrógeno o es una
eritrodextrina3 4. Registre sus resultados
- 4. Reacción de
Barfoed
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada
sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la
sustancia 2. Agregue 0,5mL de reactivo de Barfoed 3.
Caliente el tubo en un baño de agua 4. Si se forma
precipitado en dos a siete minutos, la sustancia es un
monosacárido. Después de siete minutos, el ensayo es
positivo para los disacáridos. (Esta prueba permite
diferenciar los monosacáridos de los disacáridos ya
que los primeros se oxidan más fácilmente. Como es
un ensayo no específico, es necesario tener la certeza
de que las sustancias analizadas corresponden a
carbohidratos)
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada
sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la
sustancia 2. Agregue 0,5mL de reactivo de Barfoed 3.
Caliente el tubo en un baño de agua 4. Si se forma
precipitado en dos a siete minutos, la sustancia es un
monosacárido. Después de siete minutos, el ensayo es
positivo para los disacáridos. (Esta prueba permite
diferenciar los monosacáridos de los disacáridos ya
que los primeros se oxidan más fácilmente. Como es
un ensayo no específico, es necesario tener la certeza
de que las sustancias analizadas corresponden a
carbohidratos)
- 5. Reactivo de Bial
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por
cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o
0,25g de la sustancia 2. Agregue 0,5mL de
reactivo de Bial 3. Caliente el tubo en un
baño de agua caliente 4. La aparición de un
color o un precipitado verde es ensayo
positivo (Esta prueba permite la
identificación de pentosas) 5. Registre sus
resultados
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por
cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o
0,25g de la sustancia 2. Agregue 0,5mL de
reactivo de Bial 3. Caliente el tubo en un
baño de agua caliente 4. La aparición de un
color o un precipitado verde es ensayo
positivo (Esta prueba permite la
identificación de pentosas) 5. Registre sus
resultados
- 6. Reactivo de
Seliwanoff
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por
cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o
0,25g de la sustancia 2. Agregue 0,5mL de
reactivo de Seliwanoff 3. Caliente la mezcla en
un baño de agua hirviendo. 4. Escriba sus
resultados. 5. El desarrollo de un color rojo en
dos minutos es prueba positiva para cetosas.
Pasado ese tiempo, las aldosas dan una
coloración más débil. (El ensayo utiliza la
conversión de la cetosa a hidroximetil furfural
y su condensación con resorcinol para formar
compuestos coloreados)
- 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por
cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o
0,25g de la sustancia 2. Agregue 0,5mL de
reactivo de Seliwanoff 3. Caliente la mezcla en
un baño de agua hirviendo. 4. Escriba sus
resultados. 5. El desarrollo de un color rojo en
dos minutos es prueba positiva para cetosas.
Pasado ese tiempo, las aldosas dan una
coloración más débil. (El ensayo utiliza la
conversión de la cetosa a hidroximetil furfural
y su condensación con resorcinol para formar
compuestos coloreados)
- 1. Reacción de
Molisch
- 1. Formación de
fenilhidrazonas
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