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clonagem molecular
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clonagem molecular
é usado para desenvolver o vetor recombinante
engloba a clonagem de um ou mais genes ou um pedaço longo de dna
pcr
- ciclo de desnaturação inicial do molde
- molde dna ideal é o cdna
- corresponde ao rna mensageiro maduro
- o rnam retira as regiões dos íntrons e rearranja os éxons
- adc cap na extremidade 5' e cauda polia-a na região 3'
- íntrons são a região não codificadora do gen
- éxons são a região codificadora do gen
- o transcrito primário é composto por íntrons e éxons
- o rnam retira as regiões dos íntrons e rearranja os éxons
- usamos a transcriptase reversa para obter o cdna
- cdna fita simples é usado como molde para dna polimerase
- obtemos uma biblioteca de cdna dupla fita no final do processo
- cdna fita simples é usado como molde para dna polimerase
- corresponde ao rna mensageiro maduro
- molde dna ideal é o cdna
- ciclo de polimerização exponencial
- ciclo de extensão final
- primers
- delimitam as extremidades da proteína-alvo
- se anelam (emparelhamento)
- oligonucleotídeos
- dna polimerase
- catalisa ligações fosfodiéster
- síntese no sentido 5' > 3'
- origem de replicação
- indica qual sequência será copiada
- espécie-específica
- marcas de seleção
- genes de resistência a antibióticos
- plasmídeo
- sítio múltiplo de clonagem
- região do plasmídeo que reconhece diferentes enzimas de restrição
- promotor
- onde a rna polimerase se liga
- necessário para expressão de proteína
- operador
- repressor ou ativador da transcrição
- operon lac
- expressão transiente
- expressão estável
- banco de células mestre
- alíquotas de células modificadas
- precisam passar por testes de validação
- gera o banco de células de trabalho
- banco de células mestre
- perda do plasmídeo ao longo da duplicação de células eucariotas
- expressão estável
- sítio múltiplo de clonagem
- eletroforese em gel de agarose
- diferença de potencial
- ciclo de desnaturação inicial do molde
síntese química do gen é uma alternativa ao pcr
- possível a otimização de códons
- escolher os códons mais frequentes na célula vetora
- tem mais rna transportador
- escolher os códons mais frequentes na célula vetora
- possível a otimização de códons
endonucleases
- são enzimas de restrição que clivam a ligação covalente fosfodiéster
- sequências palindrômicas
- clonagem direcional
- enzimas diferentes com extremidades coesivas incompatíveis
- ecori e xhol
medicamentos biológicos
- moléculas obtidas a partir de material biológico
- medicamentos clássicos
- insulina
- pâncreas de porco
- reações adversas no sistema imune humano
- insulina
- medicamentos modernos
- hibridoma
- tecnologia do dna recombinante
- anticorpos monocloanis
- biotecnologia
- usar células para produzir algo de interesse humano
- hibridoma
- biofármacos
- resíduos de aminoácidos humanos
- macromoléculas
- glicoproteínas
- microvariabilidades
- glicanos ligados na cadeia peptídica
- microvariabilidades
- ácidos nucleicos
- processo produtivo
- upstream
- cultivo do sistema de expressão
- células de mamífero são o sistema de expressão + usado
- modificação pós traducional
- glicosilação
- não é feita por bactérias
- modificação pós traducional
- culturas primárias
- obtidas a partir de fragmentos de tecidos de animais/humanos
- heterogêneas
- linhagem celular finita
- homogêneo
- obtido a partir de subcultivos da cultura primária
- linhagem celular contínua
- linhagem imortalizada, não termina de replicar
- transformação por processo espontâneo, virus oncogênico, etc
- células aderentes
- precisam ficar aderidas a um suporte
- frascos tipo T, garrafas rotatórias
- formato similar a fibroblastos
- soro animal
- aumenta a viscosidade do meio, protegendo s células
- a retirada do soro pode estimular células aderentes a se tornarem capazes de viver em suspensão
- sua utilização não é recomendada
- precisam ficar aderidas a um suporte
- células suspensas
- podem ser cultivadas em biorreatores
- biorreatores
- permitem o controle de muitos parâmetros de cultivo
- fornece ambiente asséptico
- biorreator de tanque agitado é o mais usado na indústria farmacêutica
- possuem agitação mecânica e dispositivos de aeração
- biorreator single use
- tendência atual do mercado
- processo de limpeza é mais simples
- bolsas com meio de cultivo
- tendência atual do mercado
- diferentes modos de operação
- batekada/descontínuo
- tudo que é necessário é adicionado no início
- produtividade limitada devido ao esgotamento de nutrientes
- batelada alimentada
- nutrientes são adicionados durante o processo
- maior rendimento
- maior densidade celular
- impurezas se acumulam no meio
- sensores detectam níveis de substrato
- maior rendimento
- modo mais utilizado na indústria farmacêutica
- nutrientes são adicionados durante o processo
- contínuo
- inserção e retirada constante de meio de cultivo
- perfusão
- retenção das células em filtros
- grandes volumes obtidos dificultam processo downstream
- permite maior rendimento
- sistema híbrido
- perfusão e batelada alimentada
- retenção das células em filtros
- perfusão
- permite cultivo por longos períodos
- não atinge altas densidades celulares
- inserção e retirada constante de meio de cultivo
- batekada/descontínuo
- permitem o controle de muitos parâmetros de cultivo
- biorreatores
- formato arredondado
- podem ser cultivadas em biorreatores
- obtidas a partir de fragmentos de tecidos de animais/humanos
- células de mamífero são o sistema de expressão + usado
- cultivo do sistema de expressão
- downstream
- purificação
- cromatografia
- polimento
- purificação
- upstream
- resíduos de aminoácidos humanos
upstream
peptídio sinal
- sinal de secreção de proteína
Information
- Description
- Mind Map on clonagem molecular, created by alina dos santos on 15/10/2024.
- Created by
- alina dos santos
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