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TECNOLOGÍA DEL
ADN RECOMBINANTE
- Conjunto de métodos empleados para localizar, aislar,
alterar, estudiar y recombinar secuencias de ADN
- Aplicaciones
- Investigación a nivel molecular
- Biotecnología
- Enfermedades
- Investigación a nivel molecular
- TÉNICAS
- Digestión del ADN con enzimas
- Enzimas de restricción
- Nucleasas que reconocen y
cortan secuencias
específicas de nucleótidos
- Reconocen secuencias
palindrómicas
- Tipo de corte
- Extremos cohesivos
- Cortar el ADN donante y vector
con la misma enzima
- Formación de puentes de H con
la secuencia complementaria
- Cortar el ADN donante y vector
con la misma enzima
- Extremos romos
- Donante y vector no
tienen por qué contener
el sitio de restricción
- Donante y vector no
tienen por qué contener
el sitio de restricción
- Extremos cohesivos
- Nucleasas que reconocen y
cortan secuencias
específicas de nucleótidos
- Mapas de restricción
- Digestión del ADN lineal con enzimas HindIII y SalI
- Los fragmentos de restricción migran en un gel de agarosa
- Digestión del ADN lineal con enzimas HindIII y SalI
- Construir moléculas
recombinantes
- Buscar fragmentos en
mezclas complejas
- Enzimas de restricción
- Construcción ADN recombinante
- 1. Extracción del ADN
- Donante
- Digestión de células
- Precipitación con alcoholes
- Digestión de células
- Vector
- ADN plasmídico
- Fago I
- ADN plasmídico
- Donante
- 2. Corte en extremos
- 3. Ligación ADN
- Donante y vector
se mezclan
- Formación de muchas moléculas
de ADN recombinantes distintas
- Sellamiento de extremos
con la ADN ligasa
- Donante y vector
se mezclan
- 4.Transformación
- Vectores de clonación
- Tipos
- Plásmidos
- pBR322
- pUC18
- pBR322
- Fago landa
- Cósmidos
- Vectores híbridos
(fago landa + plásmido)
- Sitios Cos (señales de
empaquetamiento)
- Vectores híbridos
(fago landa + plásmido)
- Otros
- BACs
- YACs
- Para células eucariotas
- Vectores no víricos
- Liposomas
- El transgen se introduce
en vesículas de lípidos
- Proceso de baja
eficiencia y selectividad
- El transgen se introduce
en vesículas de lípidos
- ADN "desnudo"
- Liposomas
- Vectores víricos
- Retrovirus
- Integran pequeños
segmentos de ADN
- Integración permanente del transgen
- Integran pequeños
segmentos de ADN
- Adenovirus
- Integran ADN de gran tamaño
- La expresión del transgen desaparece
con el tiempo
- Integran ADN de gran tamaño
- Lentivirus
- Retrovirus
- Plásmido Ti en plantas
- Vectores no víricos
- Vectores de expresión
- BACs
- Plásmidos
- Replicación autónoma
- Mapa de restricción conocido
- Marcadores específicos
- Recuperación sencilla
- Tipos
- Vectores de clonación
- 5. Amplificación
y selección
- 1. Extracción del ADN
- Genotecas de ADN
- Número de
clones
depende de
- Tamaño genoma
- Tamaño
inserto
- Tamaño genoma
- Tipos
- cDNA (ADN complementario)
- Genómicas
- Cromosómicas
- cDNA (ADN complementario)
- Número de
clones
depende de
- Hibridación
ácidos nucleicos
- Southern Blotting
- ADN digerido con una enzima
de restricción
- Fragmentos parcialmente
hidrolizados
- Marcaje de sondas
- ADN digerido con una enzima
de restricción
- Nothern Blotting
- Transferir fragmentos de ARN
desnaturalizado de un gel a un
medio sólido
- Sonda
- Transferir fragmentos de ARN
desnaturalizado de un gel a un
medio sólido
- FISH
- Colonias bacterianas
- Southern Blotting
- Análisis de ADN clonado
- PCR
- Secuenciación
método de Sanger
- PCR
- Digestión del ADN con enzimas
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