Técnicas Inmunohematológicas

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nelson garcia
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Técnicas Inmunohematológicas
  1. Clasificación de grupo ABO y D, con técnicas en tubo y antisueros comerciales METODO: a) Colocar en la gradilla 4 tubos para cada uno de los sueros clasificadores, un tubo para prueba autóloga y 2 tubos para los glóbulos A y B respectivamente. b) Colocar en cada tubo una gota de cada uno de los sueros clasificadores, en el tubo de la prueba autóloga colocar suero o plasma y glóbulos rojos del paciente y en los tubos siguientes Glóbulos A y glóbulos B según corresponda. c) Agregar a cada tubo que contiene los sueros clasificadores, 1 gota de glóbulos del paciente que se va a clasificar y a los tubos que tienen los glóbulos A y B colocar dos gotas de suero o plasma del paciente.
    1. Pruebas de coombs directa, (Técnica en Gel) Muestra: G.R. al 1% dispensando 1 vol.( 1 ml) de “SOL. I” y 10 l de sedimento de G.R. Procedimiento: Identificar cada tarjeta Añadir 50 l de G.R. al 1% en cada pocillo Centrifugar por 10 min Leer NOTA: Terminado el tiempo de centrifugación se debe leer inmediatamente, si no es posible retirar de la centrifuga y dejar en espera en la gradilla correspondiente. De los exámenes realizados en los turnos de noche se debe dejar la tarjeta para cotejar lectura en la entrega de turno en presencia de un profesional.
    2. Clasificación de grupo ABO. Técnicas en tubo y suero de paciente (reversa) a) Tomar dos tubos de Khan, rotular con GR. A, y GR. B respectivamente y el Nº de la muestra del paciente, b) Agregar dos gotas de suero del paciente al tubo marcado A c) Agregar dos gotas de suero del paciente al tubo marcado B d) Añadir a cada tubo 1 gota de suspensión de GR. A y 1 gota de suspensión de GR. B respectivamente y mezclar e) Incubar al menos 15 minutos o centrifugue a 1000 rpm. por un minuto en centrífuga clínica, f) Resuspenda las células con agitación suave. Los resultados de detección deben ser observados macroscópicamente. g) Interpretación del resultado: Aglutinación es un resultado positivo del ensayo y refleja la presencia de una reacción antígeno-anticuerpo. Si no se produce aglutinación indica la ausencia de una reacción antígeno-anticuerpo, h) Leer y anotar los resultados en la hoja de registro de “protocolo de receptores”.
      1. Pruebas de coombs indirecta (Técnica en Gel) Para la detección de anticuerpos irregulares a) Tomar una tarjeta de gel que contiene suero de Coombs Poliespecífico, ubicados a temperatura ambiente (no utilizar tarjetas que presenten deshidratación o variación en su presentación al examen ocular), b) Marcar cada pocillo con la identificación del paciente. Retirar el sello que recubre el pocillo. c) Diluir los Glóbulos Rojos de los frascos de “Panoscreen” de la siguiente manera: Marcar un frasco I y otro II; Al primer frasco I agregar una gota (50 ul.) de Glóbulos Rojos I ya agitados y agregar 200 ul. de Solución 2 Al frasco marcado II agregar una gota (50 ul.) de Glóbulos Rojos II ya agitados y agregar 200 ul. de Solución 2. d) Añadir 50 ul.(una gota) de las solución de glóbulos rojos ya preparada a cada pocillo según corresponda (I, II). e) Añadir 25 ul de suero o plasma del paciente a cada pocillo. f) Incubar 15 minutos a 37° C. g) Centrifugar por 10 minutos
      2. Investigación de la variante DU a) Colocar en un tubo una gota de suero anti D y una gota de glóbulos del paciente suspendidos en su propio suero o plasma. b) Incubar a 37°C por 15 minutos. c) Lavar 4 veces en salino o buffer. Eliminar el máximo de sobrenadante después del último lavado. d) Agregar una gota de suero Antiglobulina humana (Coombs). e) Centrifugar a 1000 rpm durante 1 minuto. Observar si existe aglutinación macroscópica.
        1. Pruebas de compatibilidad con técnicas en tubo a) Tomar la unidad de glóbulos rojos a transfundir, b) Tomar un tubo de Khan y un tubo plástico, ambos rotularlos con los cuatro últimos dígitos del código de barra de la unidad a transfundir, c) Sacar tubuladura y agregar una gota de glóbulos rojos al tubo de Khan, el resto de la tubuladura se inserta en el tubo plástico, que se guarda en el refrigerador (recipiente muestras diarias) d) Se resuspende la gota del tubo Khan en solución PBS obteniendo dilución al 5%, centrifugar por 1 minuto a 2500 rpm,, botar sobrenadante, escurrir en papel absorbente, e) Añadir 2 gotas de suero o plasma del receptor, f) Agitar y añadir 2 gotas de LISS, mezclar bien, g) Incubar al menos 15 minutos a 37° C.(se puede incubar hasta 60 minutos), centrifugar el tubo durante 1 minuto a 1000 rpm. en centrífuga clínica y examinar macroscópicamente para determinar si se produce hemólisis y/o aglutinación, h) Lavar 3 veces, durante 1 minuto a
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