Technische Anwendungen der Replikation

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Technische Anwendungen der Replikation
  1. Kettenabbruchreaktion
    1. Ende
      1. Teilt man den Sequenzierungsansatz in vier gleiche Teil, kommt es zu einem Kettenabbruch, der sequenzspezifisch ist
      2. Fortsetzung
        1. nucleophilen Angriff der freien Hydroxylgruppe am 3’-Ende an die Phosphorsäureanhydridbindung
          1. Abspaltung eines Pyrophosphatrestes
          2. Beginn
            1. DNA-Abschnitt wird mit komplementären DNA-Oligonucleotid hybridisiert
              1. DNA-Oligonucleotid dient Polymerase als Primer
              2. Analyseverfahren, das die Nukleotidabfolge der DNS bestimmt
                1. Aufklärung der Sequenz
                  1. Auftrennung des Gemisches mittels Gelelektrophorese
                    1. Ablesen der Basensequenz
                2. PCR
                  1. Thermocycler
                    1. 3.) Elongation
                      1. 5' Richtung
                        1. Erhitzen auf ca. 72°C je nach Taq-Polymerase
                        2. 2.) Primerhybridisierung
                          1. Primer heften sich an DNS-Stränge an
                            1. schnelles Abkühlen auf 50°C - 65°C
                            2. 1.) Denaturierung
                              1. Wasserstoffbrücken gehen durch Hitze kaputt
                                1. erhitzen auf 94°C - 96°C
                              2. Zutaten
                                1. Nukleotide
                                  1. hitzestabile DNS-Polymerase
                                    1. Primer
                                      1. DNS-Fragment
                                      2. DNA in kurzer Zeit sehr oft vervielfältigen
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