2305177
Technische
Anwendungen der
Replikation
- Kettenabbruchreaktion
- Ende
- Teilt man den
Sequenzierungsansatz in vier
gleiche Teil, kommt es zu einem
Kettenabbruch, der
sequenzspezifisch ist
- Teilt man den
Sequenzierungsansatz in vier
gleiche Teil, kommt es zu einem
Kettenabbruch, der
sequenzspezifisch ist
- Fortsetzung
- nucleophilen Angriff der freien
Hydroxylgruppe am 3’-Ende an die
Phosphorsäureanhydridbindung
- Abspaltung eines
Pyrophosphatrestes
- nucleophilen Angriff der freien
Hydroxylgruppe am 3’-Ende an die
Phosphorsäureanhydridbindung
- Beginn
- DNA-Abschnitt wird
mit komplementären
DNA-Oligonucleotid
hybridisiert
- DNA-Oligonucleotid
dient Polymerase als
Primer
- DNA-Abschnitt wird
mit komplementären
DNA-Oligonucleotid
hybridisiert
- Analyseverfahren,
das die
Nukleotidabfolge
der DNS bestimmt
- Aufklärung der
Sequenz
- Auftrennung des
Gemisches mittels
Gelelektrophorese
- Ablesen der Basensequenz
- Ablesen der Basensequenz
- Auftrennung des
Gemisches mittels
Gelelektrophorese
- Ende
- PCR
- Thermocycler
- 3.) Elongation
- 5' Richtung
- Erhitzen auf ca. 72°C je nach Taq-Polymerase
- 5' Richtung
- 2.) Primerhybridisierung
- Primer heften
sich an
DNS-Stränge an
- schnelles Abkühlen
auf 50°C - 65°C
- Primer heften
sich an
DNS-Stränge an
- 1.) Denaturierung
- Wasserstoffbrücken
gehen durch Hitze
kaputt
- erhitzen auf 94°C - 96°C
- Wasserstoffbrücken
gehen durch Hitze
kaputt
- 3.) Elongation
- Zutaten
- Nukleotide
- hitzestabile
DNS-Polymerase
- Primer
- DNS-Fragment
- Nukleotide
- DNA in kurzer Zeit
sehr oft
vervielfältigen
- Thermocycler
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