Procedimiento para identificar proteínas

Procedimiento para identificar proteínas

1. Fraccionar las proteínas de acuerdo a su peso molecular en una matriz de poliacrilamida usando un campo eléctrico.

   • Procedimiento
     • 1) Todo el procedimiento requiere el uso de guantes a fin de evitar la degradación de las moléculas por la acción de las proteasas presentes en la mano
       • 2)Sumergir el sistema contiendo los geles polimerizados en un tanque conteniendo buffer de electroforesis o de resolución para proteínas 1X.
         • asegurarse que los pocillos del gel estén totalmente cubiertos por el buffer.
         • 3) Mediante el uso de puntas de hasta 20 µL y 30 µL de capacidad proceder a depositar cuidadosamente la muestra en los pocillos evitando la contaminación del pocillo contiguo.
           • 4) Considerar el uso de un marcador estándar de proteínas para la medición del peso molecular de la muestra.
             • 5) Una vez finalizada la colocación de las proteínas en cada pocito del gel, cubrir el tanque con la tapa y conectar los cables correspondientes de los electrodos en la fuente de poder.
               • 6) Encender la fuente de poder y proceder a seleccionar el voltaje y amperaje correspondientes.
                 • 7) cálculo del voltaje. La distancia multiplicada por voltios (8V - 15 V) permitirá determinar el voltaje total.
                   • 8) Realizar la electroforesis hasta que el frente de corrida (visualizado como una línea azul por el colorante del buffer) haya llegado a los límites de la parte inferior del gel.
                     • 9) Finalizada la electroforesis proceder al desmontaje del equipo empezando con desconectar los electrodos de la fuente de poder ya apagada y removiendo el sistema que contiene el gel de poliacrilamida.
                       • 10) Levantar lentamente uno de los espaciadores de tal manera que se vaya realizando la separación de los vidrios que contienen el gel
                         • 11) Separar el gel de empacamiento del gel de resolución realizando un corte transversal.
                           • 12) Hacer una pequeña muesca en una de las esquinas del gel, a fin de que sirva de orientación para ubicar el orden en que fueron cargadas las muestras.
                             • 13) Remover el gel
                               • Para desprender el gel del vidrio remojarlo nuevamente con buffer de electroforesis o agua destilada y usar uno de los espaciadores a manera de espátula para levantarlo por una de las puntas.
                                 • Coger el gel cuidadosamente (usar guantes) y luego sumergirlo en un envase conteniendo el colorante azul brillante de coomasie.