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Métodos de separación de proteínas

Hernández Briseño Ixchel Química Licenciatura Cuarto English

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Electroforesis: Separa moléculas en relación carga:masa
- Libre
  - En disolución, sin soporte
    - Moléculas cargadas migran hacia electrodos; así se separan
- Zonal, con soporte
  - Campo eléctrico en el soporte y muestra depositada en zona de éste
- Bidimensional
  - 1D: Separación por enf. isoel.en gel cilíndrico
    - 2D: Uso de gel de poliacrilamida
      - Lectura
        Horizontal
        Diferencias en p.I
        Vertical
        Diferencias en peso molecular
- En papel
  - Al conectar los electrodos, las moleculas se irán a donde les corresponde de acuerdo a la carga que tengan; produciendo ondas en el papel
- En gel
  - De Poliacrilamida
    - Polimerización, gel transparente, moléculas pequeñas
  - De Agarosa
    - Moléculas de 20000 nucleótidos; para ADN hay mucha carga -; inerte
- En acetato de celulosa
  - Las proteínas no tienen carga pero a cierto pH hay grupos que les dan carga
    - Permitiendo el fraccionamiento, avanzan a +/-
Cromatografía: Método de separación formado por fase estacionaria (sólido, gel, líquido sobre sólido) y móvil (gaseoso o líquido)
- Efecto de retención: Se da en F.E sobre los analitos. Efecto de arrastre: En F.M empuja analitos
- Plana. F.E papel watman y F.M por capilaridad
- En columna: F.E dentro de ellas, F.M pasa por g o P
- Por afinidad: Inmovilización en soporte sólido, se aumenta fuerza iónica de sol. solvente
- Filtración en gel: Separación por orden de elusión; influye en orden de salida
- De intercambio iónico: Separación molecular por cargas, paso de proteínas con carga neutra o contraria
Isoelectroenfoque: Separación de proteína por P.I
- Proceso: Sol. de anfolito agregada a gel, gradiente estable de pH
  - Se aplicó un campo eléctrico, luego la sol. de proteínas y éste se reaplicó
    - Por tinción se ven las proteínas en el gradiente de pH