Mielograma y citoquimica

MIELOGRAMA
1. Estudio cualitativo y cuantitativo de la médula ósea a nivel morfológico, el que permite evaluar a través del examen microscópico, los diferentes precursores hematopoyéticos presentes en la muestra.
  1. ¿ CUANDO REALIZARLO?
    1. Frente a una alteración en el número y/o proporción normal de las células sanguíneas Cuando se encuentren blastos en sangre periférica Frente a los siguientes cuadros clínicos: pancitopenia anemia macrocítica síndromes mieloproliferativos leucemias agudas y síndromes linfoproliferativos crónicos
      1. TECNICA: PUNCION MEDULAR; ASPIRADO.
        < DE 2 AÑOS; CRESTA ILIACA Y TIBIA
        > 2 AÑOS; CRESTA ILIACA, APOFISIS ESPINAL Y ESTERNON
        ASPIRADO 0,5 – 1 mL de contenido medular , MUESTRA Solución de EDTA o directamente en varios portaobjetos, FROTIS Teñir con May-Grünwald-Giemsa, OBSERVACION 10X – 100X
        10x: Eventual presencia de células metastásicas Presencia, ausencia o aumento del número de adipocitos y/o megacariocitos
        100x; Características morfológicas de las células Establecer el recuento diferencial celular (mielograma). El recuento diferencial se efectúa en >300 células nucleadas.
        CELULARIDAD NORMAL: GRANULOCITICA 60%, ERITROBLASTICA 25%, AGRANULOCITICA 15%.
        Alteraciones del mielograma
        1) Hiperplasia eritroblástica
        a) Anemia regenerativa por hemorragia o hemólisis
        La mayor cantidad de células corresponden eritroblastos ortocromáticos
        b) Anemias arregenerativa incapacidad de los eritroblastos para madurar a eritrocitos
        ANEMIA MEGALOBLASTICA; Se observan más eritroblastos inmaduros
        ANEMIA DISERITROPOYETICA; Se ven afectadas las características cualitativas de los eritroblastos, tanto del núcleo como del citoplasma.
        c) ERITROLEUCEMIA (M6)
        Hiperplasia de la serie roja y diseritropoyesis marcada
        2) Aumento de la celularidad a expensas de la serie granulopoyética
        a) Procesos infecciosos, inflamatorios, hepatopatía crónica, metástasis carcinomatosa
        b) Leucemia mieloide crónica (LMC)
        Proliferación de todos los estadios madurativos normales.
        3) Aumento del número de linfocitos medulares
        a) Aplasia medular
        Si la linfocitosis se presenta en una médula hipocelular
        b)Leucemia Linfática Crónica (LLC)
        Si la linfocitosis se presenta en una médula hipercelular
        4) Aumento del número de células plasmáticas
        a) Hepatopatía crónica
        Plasmocitosis reactiva
        b) Mieloma
        Morfología normal en su mayoría, aunque en ocasiones se muestran rasgos de inmadurez (plasmoblastos)
        5) Presencia de macrófagos abundantes con aspecto morfológico peculiar
        a) Síndromes inflamatorios, anemia hemolítica autoinmune, hemopatías malignas, neoplasias
        Macrófagos con aumento en su número
        b) Parasitosis Leishmaniasis, malaria, Tripanosomiasis, toxoplasmosis
        Mayor cantidad de macrófagos en que el parásito se halla a veces en su interior
        6) Infiltración medular por blastos leucémicos
        a) Leucemia aguda
        Infiltración homogénea y monomorfa + Desaparición de los estadios madurativos de todas las series celulares hematopoyéticas
        7) Presencia de metástasis
        Metástasis carcinomatosa
        Acumulación de células metastásicas en diferentes puntos de la extensión o en casos más graves, la invasión de la médula ósea es total, sustituyendo la celularidad hematopoyética normal.
        8) VIH+
        a) sólo VIH+
        Alteraciones constantes: Punciones blancas (dry-tap) Cuando se obtiene material medular, se observa celularidad abundante con megaloblastosis y diseritropoyesis, con una cuota de linfocitosis y plasmocitosis
        b) VIH+ con infección diseminada por Epstein Barr Virus, Leishmania donovani, Mycobacterium avium intracellulare.
        Hipoplasia de la serie roja, intensa plasmocitosis y aumento del número de macrófagos
CITOQUIMICA
1. MPO
  1. Presente en los gránulos primarios de las células mieloides, neutrófilos, monocitos, y eosinófilos
    1. Diferencia las leucemias mieloblásticas agudas (MPO positiva) de las leucemias linfoblásticas agudas (MPO negativa)
      1. CATALIZA OXIDACION DE SUST A TRAVES DE H2O2 PROVOCANDO pp NEGRO. ( rx +)
2. FOSFATASA ALCALINA
  1. enzima que se encuentra en los gránulos secundarios de los neutrófilos
    1. PERMITE DIFERENCIAR LMC de una reacción leucemoide y policitemia vera de una eritrocitosis secundaria
      1. Los sitios en que existe fosfatasa alcalina se identifican incubando la muestra en fosfato de naftol AS-B1 en un pH alcalino. Como resultado de la actividad de la fosfatasa se libera naftol-AS, el cual se acopla a una sal de diazonio, como el violeta rojo rápido, para formar un pigmento visible y soluble.(LEER TABLA VALORACION)
3. TINCIÓN CON SUDÁN NEGRO B — SNB
  1. Colorante que tiñe fosfolípidos, grasas neutras y esteroles . Ideal para evidenciar los Bastones de Auer (LMA)
    1. Presenta la misma utilidad que MPO: Diferenciar las leucemias mieloblásticas agudas de las leucemias linfoblásticas agudas.
      1. La reacción tiñe de color negro-pardo las estructuras fosfolipídicas, como los bastones de Auer en una Leucemia Mieloblástica Aguda
4. Ácido Peryódico de Schiff - PAS
  1. Tiñe numerosos hidratos de carbono: glucógeno, mucopolisacáridos, mucoproteínas, glicoproteínas y glucolípidos Diagnóstico de la eritroleucemia (M6) Casos de leucemia linfoblástica aguda (L1 y L2)
    1. El ácido periódico, con su poder oxidante, es capaz de romper los enlaces C-C, liberando grupos aldehído. Éstos se combinan con el reactivo de Schiff, haciendo visible la presencia de carbohidratos en la célula al producir un color rojo purpura intenso
5. Tinción de PerlsTinción de Azul de Prusia
  1. Demuestra la presencia de reservas de hierro no hemínico de la MO Corresponden principalmente a las células del sistema mononuclear fagocítico y en eritroblastos Indicada para todos los casos de sospecha de Síndrome Mielodisplásico
    1. El procedimiento implica realizar una fijación de los frotis, que una vez secos, deben ser expuestas a una solución clorhídrica de ferrocianuro de potasio. Posterior a un lavado y secado, se introducen en una solución de contraste (hematoxilina o safranina). Finalmente se lava y seca al aire.
      1. OBS 40x: Reacción positiva: la hemosiderina se aprecia intracelularmente, como gránulos de color azul verdoso.
6. ESTERASAS
  1. TINCIÓN CON α-NAFTIL: La tinción de α-naftil esterasa se detecta con incubación en pH alcalino, en el cual la enzima hidroliza los enlaces éster, liberando naftol. Éste se acopla con una sal diazonio para formar un pigmento insoluble coloreado Ideal para el diagnóstico de las leucemias monocíticas agudas (M5) y leucemias mielomonocíticas agudas
    1. TINCION CON α-NAFTIL BUTIRATO ESTERASA — ANBE
      1. Reacción positiva: Se produce una gran reacción negra en la línea monocítica
    2. TINCIÓN CON α-NAFTIL ACETATO ESTERASA — ANAE
      1. Se logra detectar en monocitos y sus precursores a través de la producción de una granulación negra, muy positiva. Además se visualiza en megacariocitos, macrófagos e histiocitos. Puede presenciarse una reacción positiva y de menor grado en los eritroblastos de la eritroleucemia (M6) y hay actividad focal en los linfoblastos de la leucemia linfobástica aguda
  2. TINCIÓN CON NAFTOL AS-D CLOROACETATO ESTERASA
    1. Esta enzima se encuentra en el citoplasma de neutrófilos y sus precursores.Visible en los neutrófilos, mediante una granulación rojo brillante

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