Técnicas histológicas

Técnicas histológicas

1. Coleta de material

   • Fixação
     • Clivagem
       • Descalcificação
         • Processamento
           • Inclusão
             • Microtomia
               • Coloração
                 • Selagem
                   • Observação ao microscópio
                   • Montagem da lâmina para visualização
                 • Processo que evidencia as estruturas teciduais
                 • Tipos
                   • Coloração química: ligações químicas
                   • Coloração física: difusão dos corantes
               • Blocos seccionados em fatias finas, permitindo assim, a visualização das células e elementos intracelulares pela microscopia de luz (corte realizado pelo micrôtomo)
             • Colocação do tecido em molde de parafina que permite a microtomia
               • Formação do bloco histológico
           • Desidratação
             • Clarificação
               • Processo de remoção do álcool nos tecidos através de um agente clarificador. Assim, a parafina pode penetrar completamente no interior dos tecidos
               • Infiltração
                 • Saturação das cavidades dos tecidos ou das células por uma substância que é geralmente o meio que estes serão inclusos
             • Completa remoção da água na amostra para utilizar a parafina, que é hidrofóbica. Feita por difusão de agentes desidratantes
           • Reúne procedimentos que visam substituir a água dos tecidos por um meio mais sólido, que confira resistência e dureza suficiente
         • Tipos
           • Ácidos (mais utilizados na histologia); Histoquímicos; Soluçnoes descalcificadoras patenteadas; Resinas de troca iônica; Descalcificadores eletrolíticos
         • Fatores a serem levados em conta para escolha do método
           • Urgência do material; O grau de mineralização do tecido; A coloração a ser empregada; O tipo de fixador utilizado
       • Processo de redução de tamanho e espessura dos fragmentos fixados
       • Permite, de forma mais eficaz, a penetração do fixador e subsequentemente a melhor difusão dos reagentes durante o processamento histológico
     • Principal etapa das técnicas histológicas
     • Objetivos:
       • Evitar a autólise e a proliferação bacteriana; Parar o metabolismo celular; Preservar os tecidos; Melhorar a diferenciação óptica das células; Manter as relações topológicas e morfológicas das biomacromoléculas o mais próximo da situação "in vivo"
     • Métodos:
       • Químicos: Processo de estabilização de biomoléculas pela ação de agentes químicos
       • Físicos: Promove a conservação da amostra através de seu aquecimento ou resfriamento
     • Fatores que influeciam
       • Temperatura; Volume da mistura fixadora; Concentração; pH da mistura fixadora; Osmolaridade; Espessura da amostra; Tempo de fixação
   • Procedimento de retirada de uma amostra biológica de um organismo vivo ou morto, obtidas através de biópsias, peças cirúrgicas ou necropsias
   • Antes da coleta, deve-se organizar o espaço, separar os utensílios a serem utilizados durante o procedimento e preparar o líquido fixador em um frasco de boca larga
   • Os órgãos produtores de enzimas devem ser retirados primeiro, já que nesses a autólise ocorre mais rapidamente