Flashcards
Kapitel 20
Cards in this deck (13)
- 1Was versteht man unter Gen-Klonierung und welche Methoden gibt es?klonierung von nur einem Segment (unterschied zu klonierten Organismen)
durch PCR oder cloning vector - 2Was sind Restriktion-Enzyme?Sie erkennen auf der DNA die passende Restriktionsseite und zerschneiden dort die Helix, es entstehen Sticky Ends
- 3Was sind Sticky Ends?Kurze einsträngige Enden, welche mit anderen einsträngigen Enden temporäre Bindungen eingehen können. Die Ligase kann solche temporären Binungen zu permanenten, kovalenten Bindungen machen
- 4Was ist ein Plasmid?Ein ringförmige, autonom replizierende, DNA Doppelhelix, die in Bakterien vorkommen, aber nicht zu deren Chromosom gehören. Sie können in andere Zellen übertragen werden und so genetische Informationen austauschen.
- 5Was ist ein cloning vector?DNA-Molekül, das fremde DNA tragen, in eine Wirtzelle befördern kann.
z.B Plasmid - 6Wie läuft eine Klonierung ...1. Das Plasmid und DNA werden vom gleichen Restriktionsenzym zerschnitten (das Plasmid wird dabei nur einmal zerschnitten)
2. DNA-Fragmente werden mit den Plasmidringen kombiniert. Dabei entstehen rekombinante und nichtrekombinante Plasmide - 7...mittels cloning vector ab?3. Plasmide werden in Bakterienzellen eingefügt, welche kultiviert wird, sich teilt und multiple Kopien des DNA fragments erstellt.
- 8Welche Möglichkeiten von rekombinanten Plasmiden gibt es?- Plasmide mit einem DNA-Fragment
- Plasmide mit mehreren Fragmenten
- zwei kombinierte Plasmidringe - 9Welche möglichkeit gibt es rekombinante von nicht rekombinanten Plasmiden zu unterscheiden?1. AmpR-Gen: Macht Bakterienzelle Antibiotikaresistent.
2. LacZ-Gen: Dieses Gen im Plasmid führt zu blauer Farbe. Restriktionsenzym schneidet Plasmit in diesem Gen auf. Wenn ein Fragment eingefügt wird, kannalso keine blaue Farbe produziert werden - 10Wie kann identifiziert werden, in welcher Probe das gewünschte DNA-Fragment ist?Mittels Nukleinsäure Probe: Kurzes einsträngiges DNA oder RNA Segment, das komplementär zum Code des gewünschten DNA Fragments im Plasmid ist und mit Fluoreszenz markiert ist. Wenn das gewünschte Fragment also vorhanden ist wird es gebunden und fluoresziert
- 11Was ist PCR und wie läuft sie ab?Polymerase Chain Reaction: zur verdopplung der DNA
1. Denaturierung (durch wärme)
2. Annealing (abkühlung)
3. Extension (Replikation durch hitzeresitente DNA-Polymerasen)
das Ganze kann wiederhohlt werden - 12Wie funktioniert die Dideoxy-Sequenzierung?1. Fragment wird denaturiert
2. wird in Testbehälter mit Primer, DNA-Polymerase, die 4 Desoxy- und 4 Dideoxyribonucleotide gegeben.
3. Replikation, wobei Polymerase die verschiedenen Arten von Nucleotiden nicht unterschieden kann. An Dideo können aber keine weiteren Nucleotide angehängt werden
4. Es entstehen Stränge, die der länge nach geordnet einen farbigen code ablesbar machen - 13Wie können Proteine Produziert werden?1. Iniziierung in Wirtszelle, die dann in Kultur gezüchtet wird
2. Iniziierung in Tier, als pharmazeutische Fabriken