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Carotenos
Description
carotenos
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carotenos
grado superior
Flowchart by
Jorge Revilla
, updated more than 1 year ago
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Created by
Jorge Revilla
about 4 years ago
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Resource summary
Flowchart nodes
Inicio
Pesamos las muestras (previamente trituradas)
Añadimos 2mL de MeOH HPLC y 1,5mL de Tris-HCl
Ver preparación del Tris-HCl
Agitamos durante 5 minutos a 4ºC
Añadimos 4mL de cloroformo
Centrifugamos 10 minutos a 700 rpm
Recuperamos la fase inferior
Fase recupetrada
Resto
Matraz topáceo de fondo redondo
Repetimos la extracción 5 a 8 veces con 3mL de cloroformo
Evaporamos el cloroformo con el rotavapor a 40ºC
Basura
El resto se disuelve en 3,6ml de MeOH de pureza HPLC
Añadimos 400 uL de KOH al 60% y agitamos en atm. anóxica
Se deja reposar en oscuridad toda la noche
Calentamos a 50ºC durantre 20-30 minutos
Trasvasamos a tubos de 15mL
Limpiar matraces; 2mL de agua MiliQ, 2mL de solución A, 1mL de cloroformo y 4mL de sol. A
Agitamos y recuperamos la fase superior. A 4ºC y oscuridad
Añadimos 2mL de sol.A, agitamos y pasamos la fase superior al Falcon
Repetir hasta que la Sol. A sea incolora
Medimos el volumen recuperado de manera precisa
Y añadimos Sol.A hasta conseguir un volumen conocido
Pinchamos en el UPLC
Miramos su absorbancia (270-540nm)
Fin
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