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Muestra de 25g

Enriquecimiento primario en 225ml de caldo Fraser ó Palcam ó Leb-1, incubar a 24h ± 2h a 30°C ± 2°C

Tomar 0,1ml de cultivo anterior en 10ml de enriquecimiento secundario: Caldo Fraser ó Palcam o Leb-2, Incubar a 24h - 48h ± 2h a 30°C ± 2°C

Aislamiento e identificación, se siembra por agotamiento en agares selectivos: Oxford y Palcam, incubar a 24h - 48h ± 2h a 35°C ± 2°C

Se seleccionan colonias sospechosas, para ser aisladas en TSYE A "Purificación", incubar a 18h - 24h ± 2h a 35°C ± 2°C

Confirmación de Listeria spp.

Tinción de Gram: Bacilo corto Grampositivo (+)

Prueba de motilidad: Positiva (Forma de sombrilla)

Reacción de catalasa: Positiva (+)

Las anteriores pruebas son indicadores de Listeria spp.

¿No?, no continuar con los otros pasos, reportar ausencia/25g

Confirmación de Listeria monocytogenes

Si, continuar con las pruebas

Utilización de carbohidratos

Prueba de CAMP

Ensayo de hemólisis

Rhamnosa (+) - Xilosa (-) - Manitol (-)

S. aureus (+) - R. equi (-)

β-Hemólisis (zonas aclaras y estrechas)

Colonia de color verde grisáceo con zona negra. Si las colonias están muy juntas, todo el medio se torna de color negro-marrón.

Ennegrecimiento del caldo posterior a incubación (Caldo Fraser y Palcam)

Agar tripticasa de soya - Extracto de levadura (Turbidez)