Practica 1: Metabolitos primarios y secundarios 

Practica 1: Metabolitos primarios y secundarios

Obtención de aceite de aguacate (Metabolitos primarios)

Separar la pulpa de los aguacates y colocarla en un

recipiente de volumen suficiente para contenerlo.

Enfriar hasta que sea posible manipular el material sin quemarse.

Inmediatamente después extraer el aceite presionando la pulpa manualmente sobre una

manta de cielo.

Colocar el aceite obtenido en un frasco ámbar previamente etiquetado y

pesado y calcular el rendimiento.

Puede realizarse el

calentamiento por 11 min si el horno de microondas utiliza radiación de 2450 MHz a 859-

900 W o ajustar el tiempo de calentamiento de acuerdo con la potencia del microondas a

utilizar.

Obtención de β-sitosterol. Metabolito secundario

Colocar en un matraz Erlenmeyer (de 150 mL) 5 g del aceite de aguacate obtenido

previamente y disolverlo en 30 mL de etanol.

Añadir a la mezcla anterior 10 mL de la

solución 2 N de KOH.

Calentar en el horno de microondas hasta que la pulpa alcance

los 95 °C.

Calentar la mezcla a reflujo durante una hora y dejarla enfriar una vez finalizado el calentamiento.

Durante este

procedimiento es importante cuidar la producción de espuma.

Transferir la mezcla del matraz a un embudo de separación y extraer el

material no saponificado con

20 mL de diclorometano.

Repetir el proceso un total de 3 veces.

Agitar suavemente el

embudo para evitar la formación de emulsiones.

Lavar la fase orgánica resultante

utilizando 20 mL de agua.

Repetir el proceso de lavado 2 ocasiones más.

Secar la fase

orgánica con sulfato de sodio anhidro y destilar el diclorometano para concentrar los

componentes separados.

Pesar el producto obtenido y calcular el rendimiento de esteroles

extraídos.

Realizar una cromatografía en placa fina, utilizando placas de 3 x 5 cm impregnadas con la

solución de KOH, a las que se aplicará la muestra a analizar disuelta en CH2Cl2.

Desarrollar

la cromatografía en una cámara cromatográfica utilizando como fase móvil una mezcla de 21 hexano: éter etílico (65:35).

Revelar la placa con yodo y calcular el Rf de cada uno de los

componentes observados.

Comparar los valores de los Rf obtenidos con los datos teóricos

reportados para metilesteroles, esteroles desmetilados y alcoholes alifáticos.