Aplicación de métodos de PCR multiplex para la identificación molecular de tiburones: viabilidad y aplicaciones para la ordenación y conservación de la pesca en el Pacífico Oriental Tropical

Aplicación de métodos de PCR multiplex para la identificación molecular de tiburones: viabilidad y aplicaciones para la ordenación y conservación de la pesca en el Pacífico Oriental Tropical

1. METODOLOGÍA

   • MUESTREO
     • 458 muestras
       • Tejido epidermico
         • DNA mitocondrial
           • COI
           • EXTRACCIÓN
             • Chelex 100
               • Retira los metales de moleulas como proteinas (despliega estructura terciaria) liberando el DNA
                 • AMPLIFICACIÓN
                   • PCR multiplex
                     • Amplifica varios fragmentos del gen con varios pares de primers.
                       • Escogieron 4 grupos de tiburones
                         • Primers especificos para cada grupo
                           • Diseñados a partir de la base de datos GenBank
                         • Carcharhinidae
                         • Sphyrna spp
                         • Isurus spp
                         • Alopias spp
                     • Productos de PCR
                       • Identificados con un gel de agarosa al 2%
                         • Se tiñeron con bromuro de etidio
                           • Se visualizaron usando un transiluminador de UV
                     • Polimerasa HotStar
                       • Permite eliminar interacciones entre primers y muestras que no son objetivos de la investigación
                       • No necesita inciación o activación a diferencia de la TAQ polimerasa
                         • Se activa por desnatrualizacion
       • Tejido muscular