Técnicas de Biología molecular aplicadas a Biotecnología Alimentaria

Técnicas de Biología molecular aplicadas a Biotecnología Alimentaria

1. IMPORTANTE IDENTIFICAR

   • Metodos moleculares
     • Permiten una mejor comprensión de la fermentación de salchichas.
   • Métodos independientes del cultivo
     • Pueden evitar sesgos relacionados con el cultivo
   • Método DGGE
     • Utilizado a menudo para estudiar la ecología de las salchichas fermentadas
   • Lb. sakei y Lb. curvatus
     • Domina en varios tipos de salchichas mediterráneas
   • RAPD y Rep-PCR
     • Subrayaron la alta biodiversidad en salchichas fermentadas naturalmente.
   • La actividad microbiana y la interacción son un factor clave para las características de calidad final de las salchichas fermentadas

2. Métodos independientes del cultivo

   • Electroforesis en gel de gradiente Desnaturalizante
     • Aplicado ampliamente en la fermentación de salchichas
     • Representado por la electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante (DGGE) ( Rantsiou y Cocolin, 2008 )
     • Técnica
       • Basada en la separación electroforética de ADN bicatenario generado por PCR en un gel de poliacrilamida que contiene un gradiente de desnaturalizantes químicos (urea y formamida)
         • En el cambio la conformación de la estructura del ADN provoca una tasa de migración reducida de la molécula. En la electroforesis en gel con gradiente de temperatura (TGGE), la temperatura es el principal agente desnaturalizante.
       • Para el perfil microbiano
         • El ADN y / o el ARN se someten a PCR y / o transcripción inversa (RT) -CRP con cebadores universales, capaces de cebar la amplificación de todos los microbios presentes en la muestra
           • La mezcla compleja de las moléculas de ADN obtenidas puede diferenciarse y caracterizarse si se separa en geles de gradiente desnaturalizante.
             • Banda visibles en geles D / TGGE
               • Representa un componente de la microbiota
               • Cuantas más bandas son visibles, más complejo es el ecosistema
               • Las bandas se pueden extraer de los geles y después de la re-amplificación se pueden secuenciar para obtener las especies microbianas correspondientes
               • Mediante el uso de estos métodos, es posible no solo perfilar las poblaciones microbianas, sino también seguir su dinámica durante el tiempo
               • Los sistemas modernos de análisis de imágenes han demostrado ser valiosos para el análisis de las bandas DGGE y sus patrones asociados

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