Digestion de restriccion y análisis de Fago Lambda

Digestion de restriccion y análisis de Fago Lambda

1. En cada mesa tendrá un microtubulo con la letra L, que contendrá el ADN lambda

   • Se tendrá otro microtubulo con BR, que contendrá buffer de restriccion
     • Luego agregar las soluciones especificadas en cada tubo
       • Mezclar el contenido de cada microtubos golpeando suavemente con el dedo
         • Centrifugar por 5 segundos y volver a homogenizar los microtubulos
           • Incubar en baño maria los microtubulos durante 30 min a 37 grados centigrados
             • Añadir 2uL de loading oye (colorante de carga) en cada tubo
               • Homogenizar golpeando suavemente con el dedo o dar un minispin
                 • Preparar camara de electroforesis colocando en el interior de la misma, el gel de agarras y buffer TAE 1x
                   • Cargar 10uL del contenido de los microtubulos en el gel de agarosa de: Marcador de peso molecular, Tubo L, Tubo P, Tubo E, Tubo H, respectivamente
                     • Colocar la tapa de la camara de elecroforesis y con cuidado conectar a la fuente de poder
                       • Programar la fuente de poder a 100V por 30 mins
                         • Luego de terminar la Electroforesis deslice la bandeja para tinciones y agregue colorante Fast Blast 10 segundos. Dejar sumergido por 2 min
                           • Visualizar las bandas contraluz
                             • Medir la distancia desde el fondo Del Pozo hasta la parte inferir de cada banda de ADN y anote sus numero en la tabla de la pagina siguiente
                               • Empleando los dats del marcados de peso molecular (MPM) realizar una curva de calibración y así determinar, el numero de pares de bases en cada banda