Reacción en Cadena de la Polimerasa.

Reacción en Cadena de la Polimerasa.

1. Es una reacción química utilizada para amplificar (crear copias) fragmentos de ADN,

   • Esta reacción permite que unos pocos fragmentos de ADN se repliquen en millones o miles de millones de copias para estudiar la molécula en detalle en laboratorio.
     • El proceso de PCR por lo general consiste en una serie de 20 a 35 cambios repetidos de temperatura llamados ciclos.
       • Cada ciclo suele consistir ciclos que tienen tres pasos de temperatura
     • Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas.
       • Esto para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase y, dejar que las hebras de ADN se unan para duplicarlas nuevamente.
     • Sus pasos constan de:
       • Desnaturalización.
         • siendo el calentamiento (94-95 °C) de la muestra la forma más habitual. La temperatura a la cual se decide realizar la desnaturalización depende, por ejemplo, de la proporción de G+C que tenga la cadena, como también del largo de la misma.
       • Alineamiento
         • Se producirá la hibridación del cebador que se unirá a su secuencia complementaria en el ADN molde. Para ello es necesario bajar la temperatura a 40-68 °C durante 20-40 segundos, permitiendo así el alineamiento.
       • Elongación
         • Actúa la polimerasa, tomando ADN molde para sintetizar la cadena complementaria. Sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria a la hebra molde añadiendo los dNTP complementarios en dirección 5'→ 3'
     • Los usos de la PCR en el campo de la Genetica pueden ser como
       • PCR múltiple (PCR-M) de 19 a 22 exones usada como Técnica molecular en Deleciones Parciales Intragénicas en los Principales tipos de mutaciones en el gen de Distrofias Musculares de Duchenne
         • PCR en tiempo real. Técnica molecular para identificación de mujeres portadoras de Deleciones parciales intragénicas
       • Estudio molecular por “PCR extensa” para la identificación de la inversión génica del intrón 22 del gen
         • El estudio molecular de todo paciente con hemofilia tipo A grave debe iniciar con la búsqueda dirigida por Southern blot o por un ensayo de “PCR extensa”