Técnicas utilizadas como INMUNOENSAYOS

Técnicas utilizadas como INMUNOENSAYOS

1. Diferencias

   • ELISA utilizan como marcador una enzima y el espectrofotómetro como sistema de detección
     • iImunofluorescencia utilizan como marcador un fluorocromo y necesitan como sistema de detección el microscopio de fluorescencia

2. InmunoFluorencencia

   • Técnica utilizada para visualizar la distribución de una proteína o antígeno específico en células o secciones de tejido utilizando la especificidad de los anticuerpos por su antígeno para dirigir marcadores fluorescentes a las biomoléculas dianas de forma específica.
     • Esta dividida en
       • IFDirenta
         • Se usa unión covalente previa del fluoróforo con el anticuerpo primario, sólo requiere una única etapa de incubación con el antígeno y una sola etapa de lavado. El marcador fluorescente generalmente produce una sustancia colorada o un aumento en la cantidad de luz emitida a una longitud de onda determinada, si el antígeno está presente. En el caso de ausencia de antígeno, no hay unión del anticuerpo primario marcado y por lo tanto no hay señal.
       • IFIndirecta
         • Consiste en el uso de un anticuerpo primario no marcado que se une específicamente al antígeno diana, y el anticuerpo secundario, que lleva el fluoróforo, reconoce el anticuerpo primario y se une a él. Varios anticuerpos secundarios pueden unirse al anticuerpo primario y esto proporciona una amplificación de la señal mediante el aumento del número de moléculas de marcadores fluorescentes por antígeno.

3. ELISA

   • Ensayo inmunoenzimático ampliamente empleado en el área médica para la cuantificación de moléculas especialmente de aquellas que experimentan cambios en diferentes estados como pueden ser infecciones por bacterias, virus, hongos o parásitos o fases activas de enfermedades autoinmunes.
     • Divición
       • Directa
         • Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados..
           • Adición de anticuerpos marcados . Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
             • Adición de substrato
       • Indireta
         • Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de estudio
           • Adición del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarán específicamente con los antígenos fijados al soporte. Lavado.
             • Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima

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