Técnicas de Biología Molecular deácidos nucleicos

Técnicas de Biología Molecular deácidos nucleicos

1. Técnicas de extracción de ADN

   • Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes orgánicos
   • Lisado y purificación con un detergente iónico. Método del CTAB
   • Método de salting-out
     • A partir de un lisado celular se pueden separar las moléculas de proteínas y otros contaminantes del ADN mediante la adición de altas concentraciones de sal que hacen que disminuya la solubilidad de las moléculas orgánicas en la fase acuosa.
   • Método de extracción de ADN con yoduro de sodio como agente caotrópico en un único tubo

2. Técnicas de ampliación de ADN

   • qPcr multiplex
     • Es una variante de la PCR donde se amplifican de forma simultánea en el mismo tubo, distintas secuencias específicas
   • qPCR
     • La PCR de tiempo real o cuantitativa, es una variante que se utiliza para cuantificar la amplificación de una secuencia de DNA o mRNA de una muestra
   • RT-PCR
     • La PCR con retrotranscriptasa es una variante de la PCR diseñada para detectar y amplificar muestras de RNA

3. Técnicas de purificación de ADN

   • Cromatografía de intercambio iónico
     • Su mecanismo básico es el intercambio reversible de los iones en solución con los grupos funcionales unidos covalentemente a una fase estacionaria insoluble llamada resina
   • Comprobación de la integridad del ADN por electroforesis
     • conocer la cantidad y calidad del ADN por espectrofotometría, es importante conocer si el ADN obtenido está integro meidnate electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida al 5%
   • Cromatografía de permeabilidad
     • Separa macromoléculas disueltas por tamaño con base en su elución desde columnas llenas de un gel poroso