Análise de mãos e superfícies

Análise de mãos e superfícies

1. Colheita da amostra - Swab das mãos

   • Utilizar um swab de algodão não absorvente de 0,5 cm de diaêtro por 2cm de comprimento, em uma haste de 12 cm de comprimento, imerso em 10mL de água peptonada (0,1% -p/v) em tubo de ensaio (20x250mm), os quais devem ser esterilizados a 121 graus Celcius por 15 minutos. Após esterilizados, os swab devem ser friccionadossobre as mãos dos manipuladores de alimentos, em uma area correspondente as superficies da palma e das bordas, com movimentos giratórios da inferior da palma até a extremidade dos dedods, voltando ao punho, repetidno esse processo tres vezes na direção de cada dedo.
   • Coliformes (técnica NMP)
     • Preparo da amostra
       • Teste presuntivo
         • Teste confirmativo
           • A confirmação da presença de coliformes fecais deve ser realizada com a semeadura por alçada (diâmetro 3mm) em tubos contanteo caldo verde brilhante (VBBL) para igual número de tubos contendo caldo EC.
             • Incubar os tubos a 35 graus Celcius por 48 horas
               • O resultado positivo é observado pela formação de qualquer quantidde de gás. Para a confirmação de presença de coliformes fecais, dos tubos positivos, transferir com uma alça de platina uma pequna porção do meio para igual número de tubos contendo caldo EC.
                 • Incubar os tubos a 44,5 graus Celcius por 24/48 horas. A presença de gás no inteirordos tubinhos de Durhan é considerada reção positvia, indicando contaminação de origem fecal. A ausência de gás, mesmo com evidência de crescimento indica a presença de coliformesde outra fonte que não seja de intestinos de animais de sangue quente.
         • Após diluição das amostras, retirar 1 mL da amostra diluída e adicionar em um tubo de ensaio contendo 9 mL de caldo lauril sulfato triptose (em concentrações simples) e um tubo de Durham
           • No total, retirar 3 mL de amostra e adicionar em 3 tubos de ensaio, de diluições, total sendo de 9 tubos, os quais devem incubados a 35 graus Celcius por um período de 48 horas.
             • Decorrido o tempo, observar a formação ou não de gás e/ou turvação do meio dentro do tubo de Durhan.
               • Havendo gás dentro do tubo, significa que teste presuntivo positivo para coliformes totais. Os tubos considerados positivos, devem ser imediatamente inoculados nos meios de confirmação para evitar um crescimento muito abundante que provoque baixa no PH, o que pode provocar falso negativo.
       • Dos tubos de ensaio contendo o Swab, retirar 1 mL de amostra e adicionar um tubo de ensaio com 9mL de solução salina (diluição 10-1)
         • Agitar o tubo
           • Retirar 1 mL e adicionar em outro tubo de ensaio com 9 mL de solução salina (10-2)
             • Após agitação deste tubo, retirar 1 mL e adicionar em outro tubo com 9 ML de solução salina (10-3).
   • Staphylococcus Aureus
     • Teste Presuntivo
       • Teste de Confirmação
         • O teste de coagulase é realizado adicionando plasma coagulase e as colônias de microrganismos em tubos de ensaio, os quais sã oincubados em banho-maria a 35 graus Celcius por 4 horas, observando-se, então, a formação de coágulo a cada 30 minutos
           • Quando não é mais visível coágulos após 4 horas, o tubo deve ser colocado em estufa a 35 graus Celcius até completar 24 horas.
             • Qualquer grau de coagulação é considerado teste positivo para S. Aureus
       • Inocular 0,1mL da diluições seriadas das amostras em suas respectivas placas de Petri estéries
         • Realizar o plaqueamento em superfície com meio de Ágar Baird-parker (Acumedia), espalhando cuidadosamente o inóculo com a alça de Drigalski, encubando as placas invertidas em estufa (Binder) a temperatura 37 graus Celcius por 48 horas.
           • Os resultados são considerados positivos quando as coliôasn de microrganismos crescidas nas placas apresentm halos brancos ao redor