Enzimoinmunoensayo (EIA)

Enzimoinmunoensayo (EIA)

1. El nombre enzyme-linked immunosorbent assay, luego abreviado como ELISA, fue acuñado por los investigadores suecos Eva Engvall y Peter Perlmann , describieron el procedimiento, publicado en 1971.

   • Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color
   • Los anticuerpos utilizados en el método ELISA son de origen monoclonal o policlonal que se suministran como antisuero no fraccionado o fracciones de inmunoglobulina purificada, pueden ser solubles o estar inmóviles en un soporte sólido
   • UTILIDAD
     • Medición de niveles de hormonas: por ejemplo la medición de niveles de hormonas tiroideas o de estrógenos
     • Medición de metabolitos en suero cuya cantidad o presencia son indicios de daño celular: Por ejemplo la medición de marcadores biológicos miocárdicos como las troponinas
     • Detección de virus: por ejemplo de los causantes de hepatitis y su individualización
     • Detección del cáncer o de células tumorales: a través de sus proteínas o marcadores tumorales, liberados en el suero de los pacientes
     • Detectar exposición a agentes infecciosos: por ejemplo de rubéola o toxoplasmosis en mujeres embarazadas o en personas inmunosuprimidas.
   • TIPOS
     • ELISA DIRECTO
       • El ELISA directo es el ensayo ELISA más simple y rápido de todos, donde un anticuerpo primario marcado con una enzima se unirá directamente al antígeno de interés permitiendo la detección y/o cuantificación del mismo.
         • PROCEDIMIENTO
           • 1º El antígeno se inmoviliza sobre una placa
             • 2º Se añade un anticuerpo primario marcado con una enzima que se unirá al antígeno de interés
               • 3º Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés
     • ELISA INDIRECTO
       • Para deteccción de anticuerpos.En este caso se utilizan dos anticuerpos, uno primario y otro secundario, y es este último el que irá conjugado a una enzima.
         • PROCEDIMIENTO
           • 1º El antígeno se inmoviliza sobre una placa
           • 2º Se añade un anticuerpo primario sin marcar que se une al antígeno de interés
           • 3º Se añade un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al anticuerpo primario
           • 4º Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.
     • ELISA SANDWICH
       • En el ELISA tipo sándwich el antígeno queda inmovilizado entre dos anticuerpos, uno de captura y otro de detección también conocidos como pares de anticuerpos, que se unirán a dos epítopos distintos de un mismo antígeno
         • PROCEDIMIENTO
           • 1º El anticuerpo de captura se inmoviliza sobre la placa
           • 2º Se añade la muestra que contiene el antígeno de interés que se unirá al anticuerpo de captura
           • 3º Se añade el anticuerpo de detección que se unirá al antígeno unido a su vez al anticuerpo de captura.
           • 4º En caso de que el anticuerpo de detección vaya conjugado a una enzima, procederemos directamente con el 5º paso. En caso contrario (que es lo más habitual en los ELISA tipo sándwich), será necesario añadir un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al anticuerpo de detección.
           • 5º Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.
       • ELISA COMPETITIVO
         • también conocido como ELISA de inhibición debido al uso de un antígeno de referencia que competirá con el antígeno de la muestra por unirse al anticuerpo primario
           • PROCEDIMIENTO
             • 1º El antígeno de referencia se inmoviliza sobre la placa.
               • 2º Por otro lado, un exceso de anticuerpo primario sin marcar se incuba con la muestra que contiene el antígeno de interés, dando lugar a la formación de complejos antígeno-anticuerpo
                 • 3º Se añade la mezcla antígeno-anticuerpo a la placa, donde el antígeno de referencia competirá con el antígeno de la muestra por unirse al anticuerpo
                   • 4º Se lava la placa eliminando los complejos antígeno-anticuerpo solubles
                     • 5º Se añade a la placa un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al anticuerpo primario anclado al antígeno de referencia
                       • 6º Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que será inversamente proporcional a la cantidad de antígeno de interés presente en la muestra

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