Métodos

Métodos

1. Fluxo autofágico

   • Luminômetro
     • Rápido
       • • Caro
   • Microscópio Fluorescente
     • Permite monitoramento em tempo real
       • • Diferentes indutores podem influenciar o pH dos lisossomos
   • Immunoblotting
     • Avaliado por métodos de rotina
       • • Demorado

2. Consumo de ATP

   • Luminômetro
     • Rápido e altamente sensível
       • • Altamente sensível às flutuações de ATP relacionadas ao metabolismo • Não é possível identificar os modos de morte celular

3. Quantificação de autofagossomo

   • Microscópio eletrônico
     • Fornece informações ultraestruturais precisas
   • Microscópio Fluorescente
     • Rápido e barato

4. Ativação de caspase (substratos fluorescentes ou construções FRET)

   • Citofluorometria
     • Permite análises automatizadas por célula
   • Leitor de fluorescência
     • Rápido
   • Microscópio Fluorescente
     • Pode ser acoplado a outros marcadores de morte celular

5. Desprendimento de células

   • Leitor de impedância
     • Permite monitoramento em tempo real

6. Δψ m dissipação

   • Citofluorometria
     • Rápido, barato e sem necessidade de permeabilização
   • Microscópio Fluorescente
     • As sondas não fixável para permitir tempo real Δψ m monitorização

7. Liberação extracelular de proteínas

   • Leitor de absorvância
     • Barato
   • Microscópio Fluorescente
     • Permite o estudo de eventos tardios e é aplicável ao monitoramento em tempo real

8. Métodos imunológicos

   • Citofluorometria
     • Permite análises automatizadas por célula
   • Microscópio eletrônico
     • Insubstituível para estudos de colocalização precisos
   • Microscópio Fluorescente
     • Compatível com fixação e armazenamento de amostra
   • Immunoblotting
     • Permite o estudo dos primeiros parâmetros bioquímicos
   • Luz do microscópio
     • Permite a detecção de eventos relacionados à morte celular precoce

9. Liberação de proteína IMS

   • Microscópio Fluorescente
     • A liberação de proteínas de fusão pode ser seguida em tempo real
   • Immunoblotting

10. Lipidação LC3

    • Immunoblotting

11. Edema mitocondrial

    • Leitor de absorvância

12. Determinações morfológicas

    • Microscópio eletrônico
    • Microscópio Fluorescente
    • Luz do microscópio

13. Exposição PS

    • Citofluorometria

14. Conversão de sal de tetrazólio

    • Leitor de absorvância
      • Rápido e barato

15. Translocação de mediadores de morte celular

    • Microscópio Fluorescente

16. Detecção de quebras de fita de DNA

    • Citofluorometria
      • Útil em protocolos de co-coloração; compatível com armazenamento de amostra de longo prazo
    • Microscópio Fluorescente
    • Luz do microscópio
      • Visto como o padrão ouro para detecção de morte celular in situ (em lâminas de tecidos) por IHC

17. Corantes vitais

    • Microscópio Fluorescente
      • Facilita a identificação de células mortas por inspeção visual
    • Citofluorometria
      • Usado rotineiramente em protocolos de co-coloração

18. Geração excessiva de ROS

    • Citofluorometria
      • Barato
    • Microscópio Fluorescente