Microscopía

Microscopía

1. Microscopio óptico compuesto

   • • La mayor resolución posible es de 0.2 μm
     • Utiliza luz visible para iluminar las estructuras celulares
     • Las muestras se visualizan por las pequeñas diferencias de contraste que existen entre ellas y el medio que las rodea, y estas diferencias son debidas a que las células absorben o dispersan la luz en distinto grado.
     • Se pueden usar colorantes para teñir las células y mejorar el contraste, de modo que sea más fácil observarlas
       • Los colorantes son compuestos orgánicos, y cada clase de colorante tiene una afinidad por materiales celulares concretos
         • Los colorantes básicos se unen fuertemente a los componentes celulares cargados negativamente, como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos
     • El aumento total de un microscopio de luz compuesto es el producto del aumento del objetivo por el del ocular

2. Microscopio de contraste de fases

   • Se basa en el principio según el cual las células tienen un índice de refracción diferente al del medio que la rodea
   • La luz que atraviesa una célula tiene una fase distinta de la que atraviesa el líquido circundante
     • Esta diferencia es amplificada cuando se coloca un dispositivo en el objetivo del microscopio de contraste de fases llamado anillo de fases
       • El anillo de fases genera una imagen oscura sobre un fondo claro

3. Microscopio de campo oscuro

   • La luz llega a la muestra únicamente desde los lados
     • La única luz que recibe la lente es la que dispersa la muestra, de modo que esta aparece clara en un fondo oscuro
   • La microscopia de campo oscuro suele ser mejor que la de la microscopía óptica
   • Es un método excelente para observar la motilidad microbiana, ya que los penachos de flagelos suelen poder distinguirse con esta técnica

4. Microscopía de fluorescencia

   • Se utiliza para visualizar muestras que emiten fluorescencia
   • El DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol) es un colorante fluorescente muy usado porque tiñe las células de color azul brillante
   • La microscopía de fluorescencia con DAPI se usa mucho para el diagnóstico clínico microbiológico
   • El condensador de un microscopio de fluorescencia es de campo oscuro

5. Microscopía de contraste por interferencia diferencial

   • Es un tipo de microscopía óptica que utiliza que utiliza un polarizador en el condensador para producir luz polarizada
     • Esta luz polarizada pasa después por un prisma que genera dos haces distintos, que atraviesan la muestra y entran en el objetivo, donde se vuelven a unir en uno solo
   • Se usa normalmente con células sin teñir, ya que puede poner de manifiesto estructuras celulares internas que son prácticamente invisibles en campoi claro

6. Microscopio confocal de barrido con láser

   • Es controlado por un ordenador en el que se acopla un láser a un microscopio de fluorescencia
     • El láser genera una imagen tridimensional brillante y permite al observador acceder a la muestra desde diversos planos de enfoque
   • Mediante la iluminación exacta de un solo plano, este miscroscopio elimina la luz parásita de otros planos focales
   • El limite de resolución es de aproximadamente 0.1 μm
   • Las células se pueden teñir con colorantes fluorescentes para facilitar la visualización
   • Es especialmente útil cuando se necesita examinar en profundidad el contenido microbiano de una muestra gruesa

7. Microscopía electrónica de transmisión

   • Se utiliza para examinar células y estructuras celulares a muchos aumentos y gran resolución
   • El poder de resolución es de 0.2 nanómetros
   • Para observar la estructura interna de una célula es necesario obtener secciones finas de ella, y luego estabilizarlas y teñirlas con distintos productos químicos para hacerlas visibles
   • Se pueden observar directamente células o componentes celulares intactos mediante una técnica llamada tinción negativa

8. Microscopía electrónica de barrido

   • Se utiliza para obtener una imagen tridimensional óptima de una célula
   • La muestra se cubre con una capa fina de un metal pesado, normalmente oro
   • Un haz de electrones barre una y otra vez la muestra. Los electrones son desviados por la capa de metal y recogidos y proyectados en un monitor para producir una imagen
   • Con estos microscopios se puede obtener un amplio rango de aumentos, desde solo 15 hasta 100.000
   • Normalmente solo se visualiza la superficie del objeto
   • Las micrografías tomadas por microscopía electrónica de transmisión o de barrido son originalmente en blanco y negro.

9. Tinciones diferenciales

   • Son las tinciones que tiñen de colores diferentes distintos tipos de células
     • Tinción Gram
       • Bacterias Gram positiva se muestran de color morado
       • Bacterias Gram negativa se muestran de color rosa

10. Resolución

    • La resolución es la capacidad para identificar dos objetos adyacentes como distintos e independientes

11. Aumento

    • Es la capacidad que tiene el microscopio de agrandar una imagen

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