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NOM-113-SSA1-1994,
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NOM-113-SSA1-1994,
Objetivo y campo de aplicación
- Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número de microorganismos coliformes totales presentes en productos alimenticios por medio de la técnica de cuenta en placa.
- Fundamento
- El método permite determinar el número de microorganismos coliformes presentes en una muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias a 35°C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la producción de gas y ácidos orgánicos, los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares.
- Referencias
- NOM-109-SSA1-1994 Procedimiento para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico. NOM-110-SSA1-1994 Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico. NOM-092-SSA1-1994 Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa. NOM-112-SSA1-1994 Determinación de Bacterias Coliformes. Técnica del Número más Probable.
- Reactivos y materiales
- Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada), Fosfato monopotásico 34,0 g, Agua 1,0 l Peptona 7,0 g Extracto de levadura 3,0 g Lactosa 10,0 g Sales biliares 1,5 g Cloruro de sodio 5,0 g Rojo neutro 0,03 g Cristal violeta 0,002 g Agar 15,0 g
- Aparatos e instrumentos
- Aparatos e instrumentos
- Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada), Fosfato monopotásico 34,0 g, Agua 1,0 l Peptona 7,0 g Extracto de levadura 3,0 g Lactosa 10,0 g Sales biliares 1,5 g Cloruro de sodio 5,0 g Rojo neutro 0,03 g Cristal violeta 0,002 g Agar 15,0 g
- Reactivos y materiales
- NOM-109-SSA1-1994 Procedimiento para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico. NOM-110-SSA1-1994 Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico. NOM-092-SSA1-1994 Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa. NOM-112-SSA1-1994 Determinación de Bacterias Coliformes. Técnica del Número más Probable.
- Referencias
- El método permite determinar el número de microorganismos coliformes presentes en una muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias a 35°C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la producción de gas y ácidos orgánicos, los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares.
- Fundamento
- Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número de microorganismos coliformes totales presentes en productos alimenticios por medio de la técnica de cuenta en placa.
Objetivo y campo de aplicación
- Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número de microorganismos coliformes totales presentes en productos alimenticios por medio de la técnica de cuenta en placa.
- Fundamento
- El método permite determinar el número de microorganismos coliformes presentes en una muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias a 35°C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la producción de gas y ácidos orgánicos, los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares.
- Referencias
- NOM-109-SSA1-1994 Procedimiento para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.* NOM-110-SSA1-1994 Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.* NOM-092-SSA1-1994 Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa.* NOM-112-SSA1-1994 Determinación de Bacterias Coliformes. Técnica del Número más Probable.*
- Definiciones
- Coliformes, bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que a 35 oC fermentan la lactosa con formación de ácido, ocasionando en las colonias desarrolladas el vire del indicador rojo neutro presente en el medio y la precipitación de las sales biliares.
- Reactivos y materiales
- Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada) Fosfato monopotásico 34,0 g Agua 1,0 Peptona 1,0 g NaCl 8,5 g l Peptona 7,0 g Extracto de levadura 3,0 g Lactosa 10,0 g Sales biliares 1,5 g Cloruro de sodio 5,0 g Rojo neutro 0,03 g Cristal violeta 0,002 g Agar 15,0 g Agua 1,0
- Aparatos e instrumentos
- Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170°C. Autoclave con termómetro y manómetro, calibrada con termómetro de máximas y mínimas. Baño de agua con control de temperatura y circulación mecánica, provista con termómetro calibrado con divisiones de 0,1° C y que mantenga la temperatura a 45 ± 1,0°C. Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato o bien un homogeneizador peristáltico (Stomacher).
- Vasos para licuadora con tapa esterilizables o bolsas estériles para homogeneizador peristáltico. Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1,0° C, provista con termómetro calibrado. Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadriculada y lente amplificador. Registrador mecánico o electrónico. Microscopio óptico. Potenciómetro con una escala mínima de 0,1 unidades de pH a 25 °C.
- Procedimiento
- 9.1 Colocar en cajas Petri por duplicado 1 ml de la muestra líquida directa o de la dilución primaria, utilizando para tal propósito una pipeta estéril. 9.2 Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar, utilizando una pipeta estéril diferente para cada dilución.
- 9.3 Vertir de 15 a 20 ml del medio RVBA fundido y mantenido a 45 ± 1,0°C en baño de agua. En el caso de utilizar cajas de Petri de plástico se vierte de 10 a 15 ml del medio. El tiempo transcurrido entre la preparación de la dilución primaria y el momento en que se vierte el medio de cultivo, no debe exceder de 20 minutos.
- 9.4 Mezclar cuidadosamente el inóculo con el medio con seis movimientos de derecha a izquierda, seis movimientos en el sentido de las manecillas del reloj, seis movimientos en el sentido contrario al de las manecillas del reloj y seis de atrás para adelante, sobre una superficie lisa y nivelada. Permitir que la mezcla solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una superficie horizontal fría.
- 9.5 Preparar una caja control con 15 ml de medio para verificar la esterilidad. 9.6 Después de que está el medio completamente solidificado en la caja, verter aproximadamente 4 ml del medio RVBA a 45 ± 1,0°C en la superficie del medio inoculado. Dejar que solidifique.
- 9.7 Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35°C, durante 24 ± 2 horas. 9.8 Después del periodo especificado para la incubación, contar las colonias con el contador de colonias.
- 9.9 Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150 colonias. Las colonias típicas son de color rojo oscuro, generalmente se encuentran rodeadas de un halo de precipitación debido a las sales biliares, el cual es de color rojo claro o rosa, la morfología colonial es semejante a lentes biconvexos con un diámetro de 0,5 a 2,0 mm.
- 9.7 Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35°C, durante 24 ± 2 horas. 9.8 Después del periodo especificado para la incubación, contar las colonias con el contador de colonias.
- 9.5 Preparar una caja control con 15 ml de medio para verificar la esterilidad. 9.6 Después de que está el medio completamente solidificado en la caja, verter aproximadamente 4 ml del medio RVBA a 45 ± 1,0°C en la superficie del medio inoculado. Dejar que solidifique.
- 9.4 Mezclar cuidadosamente el inóculo con el medio con seis movimientos de derecha a izquierda, seis movimientos en el sentido de las manecillas del reloj, seis movimientos en el sentido contrario al de las manecillas del reloj y seis de atrás para adelante, sobre una superficie lisa y nivelada. Permitir que la mezcla solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una superficie horizontal fría.
- 9.3 Vertir de 15 a 20 ml del medio RVBA fundido y mantenido a 45 ± 1,0°C en baño de agua. En el caso de utilizar cajas de Petri de plástico se vierte de 10 a 15 ml del medio. El tiempo transcurrido entre la preparación de la dilución primaria y el momento en que se vierte el medio de cultivo, no debe exceder de 20 minutos.
- 9.1 Colocar en cajas Petri por duplicado 1 ml de la muestra líquida directa o de la dilución primaria, utilizando para tal propósito una pipeta estéril. 9.2 Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar, utilizando una pipeta estéril diferente para cada dilución.
- Procedimiento
- Vasos para licuadora con tapa esterilizables o bolsas estériles para homogeneizador peristáltico. Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1,0° C, provista con termómetro calibrado. Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadriculada y lente amplificador. Registrador mecánico o electrónico. Microscopio óptico. Potenciómetro con una escala mínima de 0,1 unidades de pH a 25 °C.
- Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170°C. Autoclave con termómetro y manómetro, calibrada con termómetro de máximas y mínimas. Baño de agua con control de temperatura y circulación mecánica, provista con termómetro calibrado con divisiones de 0,1° C y que mantenga la temperatura a 45 ± 1,0°C. Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato o bien un homogeneizador peristáltico (Stomacher).
- Aparatos e instrumentos
- Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada) Fosfato monopotásico 34,0 g Agua 1,0 Peptona 1,0 g NaCl 8,5 g l Peptona 7,0 g Extracto de levadura 3,0 g Lactosa 10,0 g Sales biliares 1,5 g Cloruro de sodio 5,0 g Rojo neutro 0,03 g Cristal violeta 0,002 g Agar 15,0 g Agua 1,0
- Reactivos y materiales
- Coliformes, bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que a 35 oC fermentan la lactosa con formación de ácido, ocasionando en las colonias desarrolladas el vire del indicador rojo neutro presente en el medio y la precipitación de las sales biliares.
- Definiciones
- NOM-109-SSA1-1994 Procedimiento para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.* NOM-110-SSA1-1994 Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.* NOM-092-SSA1-1994 Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa.* NOM-112-SSA1-1994 Determinación de Bacterias Coliformes. Técnica del Número más Probable.*
- Referencias
- El método permite determinar el número de microorganismos coliformes presentes en una muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias a 35°C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la producción de gas y ácidos orgánicos, los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares.
- Fundamento
- Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número de microorganismos coliformes totales presentes en productos alimenticios por medio de la técnica de cuenta en placa.
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- Mind Map on NOM-113-SSA1-1994,, created by GABRIEL DIAZ DE SANDI KUYOC on 05/06/2022.
- Created by
- GABRIEL DIAZ DE SANDI KUYOC
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