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TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

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Mind Map on TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE, created by belen4793 on 26/02/2014.
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Resource summary

TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
  1. Conjunto de métodos empleados para localizar, aislar, alterar, estudiar y recombinar secuencias de ADN
    1. Aplicaciones
      1. Investigación a nivel molecular
        1. Biotecnología
          1. Enfermedades
          2. TÉNICAS
            1. Digestión del ADN con enzimas
              1. Enzimas de restricción
                1. Nucleasas que reconocen y cortan secuencias específicas de nucleótidos
                  1. Reconocen secuencias palindrómicas
                    1. Tipo de corte
                      1. Extremos cohesivos
                        1. Cortar el ADN donante y vector con la misma enzima
                          1. Formación de puentes de H con la secuencia complementaria
                          2. Extremos romos
                            1. Donante y vector no tienen por qué contener el sitio de restricción
                        2. Mapas de restricción
                          1. Digestión del ADN lineal con enzimas HindIII y SalI
                            1. Los fragmentos de restricción migran en un gel de agarosa
                            2. Construir moléculas recombinantes
                              1. Buscar fragmentos en mezclas complejas
                              2. Construcción ADN recombinante
                                1. 1. Extracción del ADN
                                  1. Donante
                                    1. Digestión de células
                                      1. Precipitación con alcoholes
                                      2. Vector
                                        1. ADN plasmídico
                                          1. Fago I
                                        2. 2. Corte en extremos
                                          1. 3. Ligación ADN
                                            1. Donante y vector se mezclan
                                              1. Formación de muchas moléculas de ADN recombinantes distintas
                                                1. Sellamiento de extremos con la ADN ligasa
                                                2. 4.Transformación
                                                  1. Vectores de clonación
                                                    1. Tipos
                                                      1. Plásmidos
                                                        1. pBR322
                                                          1. pUC18
                                                          2. Fago landa
                                                            1. Cósmidos
                                                              1. Vectores híbridos (fago landa + plásmido)
                                                                1. Sitios Cos (señales de empaquetamiento)
                                                                2. Otros
                                                                  1. BACs
                                                                    1. YACs
                                                                      1. Para células eucariotas
                                                                        1. Vectores no víricos
                                                                          1. Liposomas
                                                                            1. El transgen se introduce en vesículas de lípidos
                                                                              1. Proceso de baja eficiencia y selectividad
                                                                              2. ADN "desnudo"
                                                                              3. Vectores víricos
                                                                                1. Retrovirus
                                                                                  1. Integran pequeños segmentos de ADN
                                                                                    1. Integración permanente del transgen
                                                                                    2. Adenovirus
                                                                                      1. Integran ADN de gran tamaño
                                                                                        1. La expresión del transgen desaparece con el tiempo
                                                                                        2. Lentivirus
                                                                                        3. Plásmido Ti en plantas
                                                                                        4. Vectores de expresión
                                                                                      2. Replicación autónoma
                                                                                        1. Mapa de restricción conocido
                                                                                          1. Marcadores específicos
                                                                                            1. Recuperación sencilla
                                                                                          2. 5. Amplificación y selección
                                                                                          3. Genotecas de ADN
                                                                                            1. Número de clones depende de
                                                                                              1. Tamaño genoma
                                                                                                1. Tamaño inserto
                                                                                                2. Tipos
                                                                                                  1. cDNA (ADN complementario)
                                                                                                    1. Genómicas
                                                                                                      1. Cromosómicas
                                                                                                    2. Hibridación ácidos nucleicos
                                                                                                      1. Southern Blotting
                                                                                                        1. ADN digerido con una enzima de restricción
                                                                                                          1. Fragmentos parcialmente hidrolizados
                                                                                                            1. Marcaje de sondas
                                                                                                            2. Nothern Blotting
                                                                                                              1. Transferir fragmentos de ARN desnaturalizado de un gel a un medio sólido
                                                                                                                1. Sonda
                                                                                                                2. FISH
                                                                                                                  1. Colonias bacterianas
                                                                                                                  2. Análisis de ADN clonado
                                                                                                                    1. PCR
                                                                                                                      1. Secuenciación método de Sanger
                                                                                                                    Show full summary Hide full summary

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