Flashcards
MICROSCOPIA
Cards in this deck (171)
- 1Los microscopios ópticos tienen un límite máximo de resolución de0,2 micras (um)
- 2El poder de resolución es ...la distancia mínima a la que se pueden distinguir o discriminar dos puntos
capacidad de dar imágenes bien definidas de puntos adyacentes, mostrándolos como
diferentes y separados - 3FACTORES DE LA RESOLUCION?LONG DE ONDA DE LA RESOLUCIÓN
(inversamente proporcional)
Angulo de apertura (lo da el medio de inmersión) o apertura numérica, que marca cual es el limite de difracción. A mas apertura numerica, mas resolucion
espesor del especimen
calidad de la fijación y la coloración - 4Como se llaman las dos lentes del microscopio?objetivo
ocular - 5como se calcula el aumento?multiplicando la magnificación que producen
el objetivo por la que producen los oculares
10x 40 = 400
algunos micrsocopios tienen oculares internos que tambien se tienen en cuenta para calcular la amplificación total - 6Usando microscopios ópticos avanzados se consiguen unos1000-1500 aumentos (objetivo de 100x más oculares de 10x o 15x)
- 7dos características que determinan la claridad con que puede ser visto un objeto pequeño:capacidad de ampliación del instrumento, que es la relación del tamaño de la
imagen vista con el microscopio y el tamaño real del objeto
poder de resolución o posibilidad de observar detalles finos. - 8Que es la capacidad de ampliación de un microscopio?la relación del tamaño de la
imagen vista con el microscopio y el tamaño real del objeto.
optico: no más de 1000
electroconicos: 1 millón - 9long de onda de la luz visible?400 a 700
- 10...Se denomina microscopio a todoaparato óptico o lente o sistema de lentes que interpuesto entre un objeto próximo al ojo y éste, permite observar al objeto de un tamaño mayor y percibir detalles no visibles a simple vista.
- 11Se considera lente asistema óptico
transparente limitado por dos o más superficies curvas, o una curva y otra plana que tienen un
eje común. - 12En el caso de los microscopios interesan las... por que?lentes convexas
dan imagenes aumentadas - 13como son las dos imagesnes que se genera en un micrsocopioreales
virtuales - 14cuantas lentes tiene el micrsoscopio compuesto? y el simple/lupa?dos sistemas de lentes en el mismo eje:
- lente que produce una imagen (objetivo)
- lente que amplía esa imagen (ocular)
simple o lupa está compuesto de una sola lente objetivo y de una sola lente
ocular. - 15Componentes de la parte mecanica de micrsocopio?pie
platina
tubo
todo articulado en el asa o brazo, que sostiene al tubo que contiene la parte optica - 16como es el pie/soporte del microsciopio?la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo
general forma de Y o bien es rectangula - 17que es la columna o grazo?también llamada asa
tiene forma de C
unida a la base por
su parte inferior mediante una bisagra
Sostiene el tubo en su porción superior y
por el extremo inferior se adapta al pie - 18que es el tubo?cilindro ubucado en la parte superior de la columna mediante un sistema de cremalleras, que permite el movimiento con tornillos
- 19que dos tornillos hay? que permiten?macrométrico: sube o baja el tubo con un mecanismod e cremallera para enfocar rapido la preparación
micrometrico: permite ajuste fino logra el enfoque exacto y nítido. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm. - 20que es la platina?es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que se
va a observar
tiene un orificio en el eje optico del tubo para que pase la luz.
Tiene también las pinzas para sujetar la muestra
puede ser fija o giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede
centrarse o producir movimientos circulares. - 21qué es el revoler?una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos.
Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de
trabajo, l - 22caracteristicas de cada lente?OBJETIVO: cerca de la muestra
distancia focal muy corta
genera imagen real, mayor e invertida
OCULAR:: cerca del ojo
agranda la imagen dada por el obejito
genera imagen virtual, no invertida y aumentada - 23como es la imagen obtenida respecto al objeto en un microscopio?virtual
mayor
invertida - 24El ocular es un sistema sencillo constituido pordos lentes convexas (que actúan como una sola), en la parte superior del tubo
de 5 a 20 aumentos - 25El objetivo está formado por ... que tipos hay?varias letnes (hasta 10) que actuan como una sola
secos
y de inmersión - 26caracteristicas de los objetivos secos? que información aportan?sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparación
ndican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos
- plan 40/0,65 y 160/0,17,
aumento 40
apertura numérica 0,65
calculada para una longitud de tubo de 160 mma - 27caracteristicas de los objetivos de inmesrión?complicado sistema de lentes.
es necesario colocar una gota de aceite de cedro en contacto con la lente
suelen ser de 100X
uno o dos círculos o
anillos de color negro - 28como son los medios en los diferentes objetivos?aire: n=1
inmersión: aceites de inmersión = vidrio = 1,5-1,6 - 29para que se usa el aceite de inmersión de cedro o un medio de n=1,5-1,5impide la desviación de los rayos más oblicuos, pudiendo así penetrar en el
objetivo, siendo posible obtener conos luminosos más extensos, con lo que aumenta el ángulo
de apertura y se mejora el poder resolutivo. - 30Partes del sistema de imluniacon?Fuente de ilimniacon
espejo
diafragma
condensador - 31Cacteristicas de la fuente de iluminación del sistema de iluminación?antes era una lampara de tungsteno incandescente sobrevoltada
ahora es un led
delante tiene al condensador y el diafragma para controlar el diametro de la parte de preparación que queda iluminada y evitar luces parásitas - 32Cacteristicas del espejo del sistema de iluminación? para que se usa cada cara?se encuentra en micrsoscopio smodernos, donde la fuente de iluminación NO esta dentro del microscopio ni alienada con el sistema optico
2 caras: concava y plana.
La concava se usa para iluminación artificial
la plana para luz solar natural - 33Los modelos más modernos no poseen espejos sino ..una lámpara
que cumple la misma función que el espejo. - 34acteristicas del condensador del condensadorde iluminación? que forma? donde se ubica? como son sus lentes?es un sistema de lentes que concentra los rayos sobre el plano de la preparción.
Forma el CONO DE LUZ con el mismo angulo que el campo del objetivo
debajo de la platina. puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajándose para su uso con objetivos de poca potencia
lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto
con la preparación cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación); - 35Como debe ser la abertura numérica maxima del condensador?debe ser al
menos igual que la del objetivo empleado, o no se logrará aprovechar todo su poder
separador. E - 36para que se usa el diafragma del condensador?egula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el
contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovechar la
resolución del sistema óptico. - 37como es la iluminacion de un objeto ampliadmayor sea el aumento utilizado
más oscura se ve la imagen
a mas apertura numérica
mayor es el número de rayos que entran al objetivo y más luminosa es la imagen obtenida. - 38que es el foco de un micrsocopio?punto donde convergen los rayos de luz y se crea la imagen
- 39una lente convergente da una imagen...virtual aumentada no nivertida
- 40Para que se usan los sisetmas de lentes?se utilizan para corregir
aberraciones ópticas y así obtener una imagen más nítida. - 41que es la apertura numérica? formula?un número adimensional que
caracteriza el rango de ángulos para los cuales el sistema acepta luz.
está relacionado con el ángulo de salida del sistema
AN=n. sen θ
siendo n el indice de refracción del medio
y θ es la mitad del ángulo de aceptancia
máximo que puede entrar o salir de la lente - 42indice de refracción del agua pira?1,33
- 43Una lente con una apertura numérica grande será capaz de visualizar... mas o menos?más detalles
ademas las lentes con aperturas numéricas grandes aceptan más luz y dan una imagen
más brillante. - 44La apertura numérica es una medida del diámetro de la apertura comparada con.. formula?la distancia focal
LR= λC/AN
λ= longitud de onda de la luz (en µm)
C= constante de proporcionalidad (está relacionada con el grado de superposición de dos puntos
para que puedan ser resueltos por el ojo humano. Esta constante suele ser de 0,50- 0,61)
AN= apertura numérica - 45Caracteristicas del examen inmediaro?material asilado
vivo, estado fresco y tamvien con tratamiento con liquodos o colorantes vitales - 46que permite ver la observación al estado fresco? que pasa si el materiale s muy espesopermite apreciar
exactamente la morfología y los movimientos
puede diluirse con igual volumen de solución salina fisiológica estéril - 47que permite ver la observación al estado mediato al que se han añadido liquodos?los liquidos modifican las propiedades ópticas de las células. Por ejemplo una mezcla
de alcohol-agua-glicerina, ácido acético, etc - 48que permite ver la observación al estado mediato al que se han añadido colorantes vitales?estudiar las estructuras sin producir la muerte ni generar artificios de tinción (falsas
estructuras generadas por el agregado del colorante). - 49que es un colorante vital? que hace?se fija sobre los
elementos celulares de un ser vivo sin ejercer acción nociva sobre él ni sobre sus células
o tejidos
no reacciona quimicamente, sino que se acumula - 50caracteisticas de un colorante vital?nulo o algo toxico
usarlo en soluciones diluidas
soluble en agua
rojo neutro,
azul de metileno, azul Nilo, azul de cresilo, violeta de cresilo, violeta de metilo y verde
jano. - 51principal problema de la muestra en fresco?la falta de contraste
el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes para identificar estructuras - 52que es la fijación?coagulación del protoplasma. lo primero que se hace
en bcaterias el calor es lo más corriente, sino el uso de formaldehidos, acidos y alcoholes - 53que pasa si fijamos + colorante?no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma
- 54que le pasa al voumen de lac elula cuandos se fija y se tiñeencoge y se hincha respectivamente
- 55los colrantes cationes de carga... se unen a ...positiva
los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos, de carga - - 56colrantes cationicos?azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.
- 57los colrantes anionesde carga... se unen anegtiva
constituyentes celulares cargados
positivamente, tales como muchas proteínas. - 58colrantes anionicos?eosina, la fucsina ácida
y el rojo Congo. - 59los colorantes liposoubles se unen a...materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la
localización de las gotículas o depósítos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro
Sudán. - 60que es un mordiente? ej?sustancia que no tiñe pero que hace que la que si tiñe actue mejor
el ácido tánìco
El mordiente se combina con un constituyente celular y
lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el colorante - 61l azul de metileno es un buen colorante simple que actúa sobre todas lascélulas bacterianas rápidamente y que no produce un color tan
intenso que oscurezca los detalles celulares.
util para diagnostico de bacterias, ya que no tiñe eucariotas - 62que es la tinción negativa? que material se usa¿las células se dejan sin teñir,
pero se colorea en cambio el medio que las rodea.
se ve el perfil de las celulas
un material opaco sin afinidad para la celula (tinta china, que es carbono coloidal); nigrosina (negro colorante insolbule en agua) - 63mejor uso de la tincion neativa además de dar contrate?revelar la presencia de cápsulas alrededor
de las células bacterianas. - 64que errores da una tinción?en ocasiones precipitados o
agregados que parecen estructuras celulares auténticas,
artefactos - 65Pasos de preparaicon de un frotis?portaobjetiso limpio y seco, se pone una gota del material a teñir o se arrastra el isopo (se puede usar una aguja esteril para pasar cultivo al porta objetos)
suspender el meatrial en una gota agua o solucion salina
sie suna colonia pequeña, para que no se pierdan, se usa una varilla de madera estreil
dejar secar en el aire o pasarlo por una llama azul hasta que este caliente pero sin quemar - 66PASSOS DE LA CONFECCIÓN EN PARAFINA DE UNA MUESTRA?Fijación : conservar la morfologia y composicion de los tejidos
Deshidratar en alcohol al concentración creciente (50-70-100) para eliminar agua
aclarar o diafanizar en bezol, xilol o toluol, solventes del aclohol o la parafina. Se hace para embeer la pieza con una mezcla miscible con la parafina
meterlo en parafina fundida en uan estufa de 60 grados. La prarafina penetra en el tejido y las celulas, embienedo el tejido y permitiendo el corte a microtomo
echar la pieza en un molde rectancular que tiene la parafina y obtenemos asi un bloque de forma regular
REHIDRATAR
TEÑIR - 67que finalidad tiene la fijación de la muestra?1 Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.
2. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste.
3. Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos (enzimas de autolisis y degeneracion)
4. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula. - 68composicion de quimicos para fijación? de base aclohol? como funcionanFormaldehído al 5%
Formol al 10%
Formalina
permite el uso con amortiguadores y otros fijadores
reacciona con los grupos amino, creando enlaces transversales
lo que mas se usa el el formol 10% - 69composicion de quimicos para fijación? de base quimica?? como funcionanGlutaraldehído al 2.5%
Tetróxido de Osmio
Líquido de Helly : 2.5 g de bicromato de potasio, 5 g de cloruro de mercurio, 100 ml de agua y 5 ml de formol.
Fijador de Bouin: 75 ml de solución acuosa saturada de ácido pícrico, 25 ml de formol y 5 ml de ácido acético glacial.
todos hacen enlaces transfersales con la proteina - 70reglas de oro de la fijación?el menor tiempo posible desde que muere la muestra
l tamaño de la muestra debe de ser de 2-3 cm. - 71porque se hace una secuencia ascendente de aclhol para deshidratar?con n una solución al 100% de alcohol inmediatamente, el agua saldría muy
rápido del tejido y se deformaría. - 72que es el proceso de aclaramiento o diafinización? que se usa?pasar a una solución de una sustancia que es miscible tanto con el alcohol como con el medio de inclusión a utilizar (en la mayoría de los casos se utiliza como
medio de inclusión Parafina líquida).
Xileno o Xilol.
ambién se pueden utilizar Tolueno,
Benzol o Cloroformo como medios de aclaramiento. - 73porque se llama aclarmiento al aclaramiento?el tejido se torna transparente o claro en el
xileno, esto se debe a que cambia su índice de refracción. - 74que medios se suelen usar par ala inclusión de la muestras? para que se hace?gelatina y parafina
Distinguir entre sí las células superpuestas en un tejido y la matriz extracelular
• Tener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y corte. EL TACO - 75a que tempira se hace la parafina? cuanto dura?se coloca la muestra en un recipiente y se le agrega la parafina fundida a 60º C, colocando la muestra en una estufa de 30 minutos a 6 horas manteniendo la temperatura a 60º C.
- 76que pasa al aplicar calor en la inclusión?el xilol o el benzol se evaporan y los espacios anteriormente ocupados por ellos
son ahora ocupados por la parafina - 77Grosor de corte del microtomo?3-10 micras
- 78grasas o lípidos se extraen en el proceso de aclaramiento y las enzimas quedan inactivadas por el calentamiento de la inclusión. como las observamos?Técnica de Congelación de Tejidos. Un tejido congelado, es los suficientemente duro para ser cortado.
se usa N liquido para congelar rapido y se usa el microtomo de congelación. Otra opción más avanzada es el criostato - 79ventaja de la tecnica de la congelación de tejidos?los cortes que se obtienen son muy rápidos, se puede utilizar en el
diagnostico rapido - 80que cortes se requieren en el la M.E.? que herramienta se usa?ultrafinos
25 a 100 nm NANOMETROS
MICROTOMO CON HOJA DE VIDRIO O DIAMANTE
Una vez preparados, se montan sobre
rejillas de cobre con un diámetro de 3mm. - 81Que se hace con el corte del TACO?se colocan sobre portaobjetos a los que se les ha agregado una pequeña cantidad de
Albúmina, la cual actúa como adhesivo. - 82Como se elimna la parafina antes de teñir? y la rehidrataciónse elimina en un solvente orgánico, de nuevo se incluyen en Xilol, y la muestra se
rehidrata haciéndola pasar por una serie de graduaciones decrecientes de alcohol etílico hasta
llegar a una solución 100% de agua. - 83que se hace tras REHIDRATAR el tejido?teñir
se suele usar HEMATOXILINA y EOSINA - 84Que se hace tras teñir el objeto?deshidrata de nuevo, de tal manera que pueda fijarse de modo permanente el CUBREOBJETOS con un medio adecuado para el MONTAJE (por ejemplo una
gota de Bálsamo de Canadá o similar). - 85es siempre necesiaria la deshidratación final?no
Los medios de montaje pueden ser miscibles o no miscibles en agua, si son miscibles en agua ya no es necesaria la deshidratación después del
teñido, se puede montarlo directamente - 863 clases de colorantes?Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula.
especializados en los componentes fibrosos de la matriz
extracelular.
Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales con ellos. - 87Caracteristicas de la EOSINA? y de la HEMATOXILINA?Acido
su tinción se basa ne las anilinas ácidas.
no es un colorante básico, posee propiedades muy semejantes a las anilinas básicas. Se usa con mordientes - 88Qué es un colorante básico?una molécula de anilina que tiene una o más cargas positivas en su
porción coloreadas - 89que son las anilinas? con que reaccionanSon colorantes básicos que reaccionan con
-los grupos anionicos (grupos fosfatos del material genetico),
- grupos sulfatos de los glucosaminoglucanos
- grupos carboxilos de las proteina - 90Los colorantes básicos verdaderos no suelen usarse en secuencia en donde el colorante básico es seguido por uno ácido, por que...la anlinia basica se disocia del tejido en los lavados posterioers en solucion acuosa
- 91a que se unen los colorantes acidos?por medio de enlaces
electrostáticos
reaccionan con grupos catiónicos, como los GRUPOS AMINO IONIZADOS de las proteínas. - 92que componentes son basofilos(que se unen a colorantes basicos-hematoxilina?)La Heterocromatina y los Nucleolos del Núcleo por los grupos Fosfato ionizados.
• Ergatoplasma (parte del citoplasma) por grupos Fosfato ionizados.
• Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados. - 93que componentes son acidófilos(que se unen a colorantes acidos?)La mayor parte del citoplasma no especializado.
• Filamentos Citoplasmáticos.
• Fibras extracelulares.
esto es por los grupos aminos ionizados - 94como podemos regular la claridad de lamuestra?No utilizar el diafragma para reducir la
claridad; para ello disminuir la intensidad de la lámpara o interponer filtros. - 95Caracteristica del microscopio invertido? que permite?el revolver esta debajo de la platina
la luz, que pasa por condensador y diafragma, llega por encima de la platina.
se usa para estudiar monocapas celulares cuando se trabaja con botellas o tubos de cultivo.
permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una prepaación previa, favoreciendo el seguimiento del estado de crecimiento, comportamiento y demás parámetros involucrados en el desarrollo del cultivo. - 96limitación del M. invertido?su limitado aumento, debido a que los objetivos más
potentes son de 40X y de 60X - 97El micrsocopio de campo claro es el que hay comúnmente en los laboratorios que necesita?muestra fina
utilizar métodos de tinción para dar contraste - 98para que sirve el M de contraste de fases? En que se basa?observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas y cortes semifinios sin color
las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido - 99Como trabaja la luz el M de contrastte de fase? como se ve cada cosa?La luz que pasa por regiones de mas indice de refracción se deflexan y quedan fuera de fase respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra.
el condensador, anula la amplitud de la porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste útil
sobre la imagen
las partes densas se ven oscuras
las partes claras son las menos densas - 100como funciona el microscopio NORMASKTI o de contraste de de fase con interferencia (DIC) que es ideal ver en el ?Usa transiluminación
permite saber la densidad optica de la muestra y ver detalles
se ve como el contraste de fase pero sin ver halos de difracción
especímenes no coloreados y transparentes muy difíciles de manejar, (ej: fecundaciones in vitro) - 101que tipo de liuz usa el microscopio NORMASKTI o de contraste de de fase con interferencia (DIC)Emplea luz polarizada la cual pasa por dos prismas birrefringentes (Nomarski, Wollaston) que la fraccionan
en dos rayos cuyos trayectos e índices de refracción son diferentes, dando como resultado una imagen del espécimen en 3D o relieves que corresponden a las variaciones de la densidad óptica de la muestra con énfasis en líneas y bordes, como si la célula proyectara sombras hacia un lado - 102Como funciona el microscopio de campo oscuro? como se ven las cosas?utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen
El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo
lo transparente queda oscuro
las superfiices y particulas se ven brillantes por la luz recibida y dispersada - 103que uso tiene le microscopio de campo oscuro?elementos biológicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminación normal, sin fijar la
muestra, es decir, sin matarla.
tambien para metales de alta reflactancia - 104que equipo especial tiene el M de campo socuro?condensador especial que ilumina la
muestra con luz fuerte indirecta.
el campo visual se observa detrás de la
muestra como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeñas partículas brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo - 105que tipos de condensadores se usan en el M. Campo oscuro?dos tipos:
tipoparaboloide (tiene una superficie espejada),
tipo cardioide, con dos superficies
espejadas
uso indistinto, mientras que la luz no incida directamente en el objetivo, sino que incide con una
apertura numérica mayor al del objetivo. - 106Caracteristicas del M. Fluorescencia? que filtro necesita?usa la UV
la muestra se ilumina por rayos de x long de onda y se observa la radiación EM que emiten, de mayor long de onda
fILTROS ESPECIALES para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y
encima del objetivo.
retienen la radiación ultra-violeta, que es peligrosa para el ojo humano, dejando pasar solamente la
radiación visible, que no es peligrosa - 107que tipos de muesstra se ven en el M. FLUORECENCIA?detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o
sustancias marcadas con fluorocromos artificiales o neurotransmosires - 108que es un fluorocromo?molecula que puede excitarse al absorber UV y luego regresan a su estado fundamental, emitiendo radiacón de mayor long de onda
vamos, que es fluorescente - 109Como son las lentes de M.FLUORESCENCIA?cuarzo ya que el vidrio absorbe
la radiación ultra-violeta. - 110que es la epifluorescenciaHoy día se utiliza mucho un microscopio de fluorescencia en el cual la luz es emitida desde arriba del preparado (epifluorescencia), se denomina también microscopio de luz fluorescente
incidente. - 111ventajs del M. de FLUORESCNECIA?Sirve para observar muestras con poco procesamiento, NO requiere el uso
de microtomos ni ultramicrotomos, ni requiere recubrimiento del material,
lo que es imprescindible es que la muestra posea fluorocromos naturales o artificiales - 112que es un fluorocromo y un fluoroforo?• Fluorocromo: Marcador colorante fluorescente empleado en investigación para crear contraste
en zonas determinadas de los especímenes.
• Fluoróforo: Parte de una molécula (fluorocromo, proteína) que presenta la propiedad de tener fluorescencia. - 113long de odna de la UV? que resolucion puede alcanzar?200 nm
100 nm.
permite mejorar
el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta. - 114Base del M de UV? que se puede ver?La microscopia ultravioleta no es muy
diferente del funcionamiento de un espectrofotómetro pero sus resultados son registrados en
fotografías
ADN, proteinas con ciertos aa
cuantificación de material genetico con long de onda especifica
Ccomo la radiación ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con
fosforescencia, en fotos o con escaner electronicos - 115Puede observarse directamente un M. de UV?NO
daña los ojos - 116material opitco del M de UV?Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda más cortas de la luz ultravioleta, los elementos
ópticos de estos microscopios están hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de espejos aluminizados. - 117La fuente luminosa de UV?a lámparas de arco de mercurio o xenón.
- 118Bases de la micrsocopia de polarización?se les han añadido dos
polarizadores de cuarzo y nicol (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador).
solo deja pasar luz que vibra en un solo plano.
según que los dos nicoles estén paralelos o cruzados la luz del campo del microsocpio será clara u oscura - 119que compuestos se ven con el M de polariación?Algunos compuestos inorgánicos responden al efecto de la luz, éstos tienen un alto grado de
orientación molecular (sustancias anisótropas),
efectiva en el estudio de muestras ricas en materiales birrefringentes. Mejor imagen de todas
y es ideal para observar y fotografiar aquellos elementos que son visibles gracias a la anisotropía, de allí su
uso en cristalografía y estrucutras celulare sbirrifirgentes (musculos estraidos, esqueleticos, cristaloides intracelulares) - 120que es la birrifrigencia?Al fenómeno de
extinción de luz causado por estos planos atómicos y orientaciones moleculares - 121que tipos de luces puede usar la M de Polarización?luz transmitida
luz incidente
(transiluminación y epi-iluminación, respectivamente). - 122en la M. luz polarizada, como se llaman los filtrso?un filtro polarizante llamado
polarizador entre la fuente de luz y la muestra
segundo polarizador, denominado
analizador entre el objetivo y el observado - 123que se usa en la M.E?electrones acelerados con λ asociada bastante menor de 1 Å
- 124Resolución dela ME?resolución atómica
- 125Como se generan los electrones del ME?por efecto termo-iónico en un filamento (cátodo) que es generalmente wolframio, y se monocromatizan acelerándolos a través de un potencial (E) en un
sistema sometido a vacío. - 126la interacción entre los electrones y la materia es XXXXXX que no se cumple le teoría cinemática (fenómenos de difracción múltiples) y, por tanto, inxxxxxxxxxxx de electrones es muy complicado.Muy fuerte
terpretar las intensidades de
la difracción - 127Componetnes de un M. electronico?cañón
que emite los electrones
lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones (las lentes normales no sirven)
sistema de vacio (el aire desvia el electron)
un sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones. - 128como se trata las preparaciones para el ME?con colorantes especiales de la microscopia
electrónica, tales como ácido ósmico, permanganato, uranio, lantano o plomo
son atomos de alto peso molecular y dispersan bien los elecctrones y presentan un contraste muy aumentado - 129se usa la Tinción negativa en el ME?SI
la mas habitaul es con ácido fosfowolfrámico
(fosfotúngstico) un compuesto de W, un metal pesado, que preserva la información estructural del espécimen o muestra a visualizar en el estudio - 130como se examinan las superfices celulares del ME?pueden prepararse réplicas de carbono evaporando sobre la superficie de las células una fina capa de carbono que se adapta a los contornos de la superficie celular y que cuando es
desprendida resulta suficientemente delgada para poder observarse directamente al microscopio
electrónico. - 131Que es la criocorrosiion en la ME?Tecnica evita la formación de artefactos al eliminar la fijación química y la inclusión
la muestra se congela y se corta con diamante, quitando las porciones de las superficies de las células.
luego se les hace replicas de carbno de esas superifices pudiéndose observar
estructuras superficiales o internas de las células. L - 132Tipos de M.E?Transmisión
Barrido
Barrido ++ transmisión
Microanalizado de sonda de electreones - 133funcionamiento del TEM(Transmisión=dirige el haz de electrones hacia
el objeto que desea aumentar y examina una gran parte de la muestra cada vez
Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espécimen.
Pueden
aumentar la imagen de un objeto hasta un millón de veces. - 134Funcionamiento del SEM (Barrido)crea una imagen
ampliada de la superficie de un objeto.
no hay que cortar el objeto, puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos.
explora la superficie de la imagen punto por punto, barriendo la muestra con un haz de electrones muy concentrado
amplia 20000 veces - 135siempre hay que cortar la muestra en la EM?NO, La SEM no hace falta
pero son TEM si, hay que ser ultrafino ya que el electron debe atravesar la meustra - 136que ME produce imagenes 3d?el SEM (Barrido)
- 137ampliaciaón de SEM? y TEM?200.000 y en 3D
1 millon o más - 138Capacidad del microscopio electrónico de barrido y transmisión (STEM Scanning Transmisión Electron Microscope)combina los elementos de un SEM y un TEM, y puede mostrar los
átomos individuales de un objeto. - 139Como funciona el microanalizador de sonda de electrones?es un ME con un analizador de espectro de rayos X.
Analiza los Rayos X de la muestra al ser bormbardeado con eletctonres
Dado que la identidad
de los diferentes átomos y moléculas de un material se puede conocer utilizando sus emisiones de rayos X, se genera una imagen ampliada y adeas da ifnromación de la composicion quimica - 140Componntes del TEM?filamento de tungsteno calentado que emite electrones (cátodo)
Anodo para atraer los electrones
diferencia de alto voltaje entre anodo y catodo para acellar los electrones y crear el haz
electroimanes para dirigir los e
Lentes condensadoras forma el haz y modifica el diámetro del haz que incide en el plano del espécimen. - 141Donde se ven la imagen del TEM¿la imagen final se visualiza sobre una planilla cubierta con fósforo.
una placa fotográfica o un detector de vídeo por encima o
por debajo de la pantalla del visor - 142Como se ve la muestra del TEMpLo que atraviesa los e aparecen brillantes
la muestra que absorbe o rebota e por su densidad o por el recubrimiento de metal pesado, aparece osucro - 143Como se prepara la muestra para TEM?fijación con glutaraldehido,
lavado con un tampón o buffer
fijación con tetróxido de osmio a las membranas (componetnes fosfolipidocs)
Deshidratación ( A menudo, se agrega nitrato de uranilo)
(enl afijación o deshidratación se añaden los iones de metales)
cortar con ultramicrotomo. se les hace flotar en liquido y se colocan en rejillas de malla de cobre recubiertas por plástico. Estas rejillas tienen 50-400 orificios por pulgada o hendiduras especiales para observar cortes
seriados. - 144Cuantas magnitudes es mas fino el MO que el ME?magnitud 3-4 órdenes menores o más finos que los utilizados para el
microscopio óptico.
n para el TEM piezas de tejidos no mayores de 1 mm3. y de grosor 50 nm y 150 nm. - 145Como se hace la inmersisón secuencial en el TEM? QUE DOS QUIMICOS SE USAN?La inmersión secuencial en soluciones de acetato de uranilo y citrato de plomo se usa rutinariamente para teñir los cortes antes de observar
- 146Hay que fijar sirmpe el material ene l TEM'NO
En congelación-fractura puede no estarlo
si está fijado, se elimina el fijador del tejido por medio de
lavados, antes de procesar - 147como se procesal amuestra del TEM para congelación-fractura?Se infiltra el tejido con un crioprotector, como el glicerol y se
congela rápidamente a unos – 160ºC - 148Uso principal del SEM? EN QUE SE BASA?análisis de superficies de muestras
características microscópicas de la
muestra
la amplificación electrónica de señales generadas al irradiar la superficie de la muestra con
un haz muy estrecho de electrones. - 149Con que se recubre la muestra en el SEMPuna capa de carbón o una capa delgada de un metal como el oro para darle propiedades conductoras a la
muestra
ha de ser suficientemente grueso como para que circule la corriente eléctrica que se deposita en la muestra y suficientemente delgado para que no tape la muestra - 150En el SEM, un detector mide...electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de
muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de
TV o una imagen digital. Su resolución está entre 4 y 20 nm, dependiendo del microscopio - 151procesamiento de la muestra para SEM?la muestra tiene que estar seca y ser conductora de la corriente eléctrica (se da en metales pero eno en todas las muestras bioloficas)
para hacer a la muestra conductora, se la recubre de una capa
de algún material conductor tal como el carbón o el oro. - 152que pasa con los elcetrones del SEM?rebotan
chocan y ceden su energia a otros electrones que se libran (e secundarios)
producri rayos X, electrones auger, etc
lo que se suele detectar son los E secundarios, que proporciona una imagen de la morfología superficial - 153en el SEM, al ver rayos x, que obtenemos?la señal de rayos X proporciona espectros e imágenes acerca de la composición de elementos
químicos en la muestra. - 154Commponentes del SEM?Un cañón de electrones con un filamento que actúa como emisor de E
lentes electromagnéticas encargado de focalizar y reducir a un diámetro
muy pequeño el haz de electrones
sistema de barrido que hace recorrer el haz de electrones ya focalizado
Uno o varios sistemas de detección que permiten captar el resultado de la interacción y pasarlo a señal electrica
Una salida conectada a una o varias bombas que producen el vacío necesario - 155por que usamos los E secundarios en la SEM?Debido a la baja energía de los electrones secundarios, en su viaje hacia el exterior de la muestra, van perdiendo energía por diferentes interacciones, de forma que sólo los que están muy
próximos a la superficie tienen alguna probabilidad de escapar del material y llegar al detector. Por tanto, la señal de secundarios procede de la misma superficie y de una pequeñísima zona por
debajo de ella, en torno a unos pocos nanómetros. - 156vENTAJA DE SEM?la mayor parte de la muestras se pueden examinar sin apenas preparación. No obstante, en algunos
casos, sobre todo en material biológico, la preparación es algo más complicada - 157Como se ahce el recubrimiento con oro en la SEM? el sputtering=necesario para eliminar o reducir la carga eléctrica que se crea rápidamente
en la superficie de una muestra no conductora cuando se barre con un haz de electrones de alta energía.
es una fuente de alimentación en corriente continua de 1-3 KV conectada por una parte a una tarjeta de oro o paladio, y por otro lado, a la muestra.
todo en una bomva de vacio
se mete gas argon al vacio y los atomos impactan con el oro y desprendan aotmos de oro que van a la mesutra - 158Como se ahce el recubrimiento con carbon?dos electrodos conectados a una fuente de corriente alterna de bajo voltaje y alta
intensidad entre los que se intercala una barra de carbono terminada en punta afilada.
Pasa por la corriente y la punta de la barra se va evaporando, de forma que rocía la muestra
un muelle mantiene en todo momento en
contacto con el otro electrodo
todo en el vacio - 159problema de cubrir con oro en el SEM?imposibilita, en la mayoría de los casos, la obtención de
un espectro de rayos X de elementos, ya que absorbe la mayoría de los
rayos X procedentes de la propia muestra, que intentan emerger a través de la superficie.
el carbono es más trasnparente a los rayos X - 160que aporta la micrsocopia confocalmás delgado sea, más nítida será la imagen; pero con este método se pierde la información tridimensional durante el corte.
Si una muestra gruesa es observada al microscopio fotónico, la imagen que se enfoca se ve contaminada por la superposición de los elementos del
tejido que están fuera de foco, tanto por encima como por debajo del plano enfocado; la imagen enfocada se deteriora a causa de las estructuras superpuestas borrosas o no enfocadas.
Esto lo ARREGLA - 161que aporta la confocal? LA DE ORDENADORpermite realizar cortes ópticos finos a muestras de tejidos más o menos gruesos y realizar
reconstrucciones en tres dimensiones a partir de cortes seriados
permite tener imágenes de la
arquitectura tridimensional de células y tejidos. - 162Como se ve la imagen de la confocal?permite enfocar únicamente un plano , un corte otpico
determinado del espécimen, eliminando la luz (fluorescencia) procedente de las regiones que no
están en el plano de enfoque.
si no se usa, auqnue se enfoque, se ve borroso, porque no puede enfocar en 3D - 163que ventaja tiene la confocal?la alta calidad de las
imágenes que proporciona a partir de especímenes preparados
Uso de la fluorescencia (epi-fluorescencia).
Enfoca un solo plano del espécimen.
o Elimina la información proveniente de otros planos no enfocados del espécimen.
Obtención de cortes ópticos seriados a partir de muestras con cierto grosor o cuyo corte fino se dificulta.
Gracias a programas de computación, se combinan los cortes ópticos seriados y a partir de ellos se reconstruye en tres dimensiones la estructura observada. - 164Cual es el principio dela confocal? que necesitailuminar el espécimen punto por punto y elimina la
luz proveniente de los planos no enfocados.
necesita una fuente de luz muy potente,
un filtro con un agujero (pinhole) que se coloca en el trayecto del rayo de luz - 165que luz usa la confocal?Minsky lo logró con una lámpara de arco de zirconio, pero en los microscopios modernos se
emplea un rayo laser, cuya longitud de onda puede estar disponible en un amplio rango de
frecuencias. - 166Componentes de la microscopia confocal?fuente de luz: laser multifrecuencia (UV-IR segun el marcador que se necesite) o lamapra de arco
sistema optico: como los de MO pero complemetnados con la optica moderna y la tecnologia electronica
filtros de interferencia: espejos dicromáticos o dicroicos, barreras con agujero de diámetro variable y diversos filtros de excitación (para seleccionar la longitud de onda
• Detectores: Son fotodetectores muy sensibles a la fluorescencia emitida
Computadora - 167en la confocal que es la tencia de escaneo con un solo rayo (laser) y el escaneo con múltiples rayos.La primera es la
popular y emplea un par de
espejos controlados por computadora para escanear el espécimen.
La técnica multi-rayos utiliza
una lámpara de arco y el escaneo se realiza gracias a un disco rotatorio (disco de Nipkow) conformado por micro-lentes y micro-agujeros. Esta última técnica de iluminación disminuye el
daño a los especímenes e incrementa la detección. - 168grosor de las imagenes de confocal?rango de 0.5
1.5 micrómetros
Se pueden obtener de una manera no invasiva a partir de especímenes
fluorescentes cuyo espesor puede variar entre 50-100 micrómetros. - 169La epi-iluminación es y se emplea:luz que incide desde arriba o lateral empleada en microscopía de fluorescencia
- 170lo que le hace el pinhole en cofoncal a la luz esdiscriminar segun las coordenadas
- 171La secuencia correcta para la preparación de cortes en microscopía es :c) fijación-deshidratación-aclaramiento-inclusión-corte
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- C1 Opos Flashcards on MICROSCOPIA, created by Aaron Garrido Cabello on 18/03/2026.
- Created by
- Aaron Garrido Cabello · Mar 2026
- Updated
- Mar 19, 2026
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