Caso 6. Metodologías convencionales para la detección de hongos y levaduras en cereales y/o productos de panificación

Metodología convencional para la detección de hongos y levaduras en alimentos

Preparación de la muestra

Tomar una muestra representativa de 25-50 g

Agregar 10g + 90mL diluyente de peptona y homogenizar en Stomacher durante 2 min.

Hacer las diluciones apropiadas 1:10 (1 + 9) en agua con peptona al 0,1%. Deben bastar diluciones de 10 -6

Metodología

Metodología según:

NOM-111-SSA1-1994

Metodología según:

BAM Capítulo 18

Colocar por duplicado en cajas Petri 1 ml de la muestra líquida directa o de la dilución primaria, utilizando pipeta estéril.

Verter de 15 a 20 ml de agar papa dextrosa acidificado, fundido y mantenido a 45 ± 1 °C en un baño de agua. No deben pasar más de 20 min desde que se prepara hasta que se vierte.

Mezclar el medio con 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en el sentido contrario y seis de atrás para adelante, sobre una superficie lisa. Dejar que la mezcla se solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una superficie horizontal fría.

Preparar una caja control con 15 ml de medio, para verificar la esterilidad.

Invertir las cajas y colocarlas en la incubadora a 25 ± 1°C

Contar las colonias de cada placa después de 3, 4 y 5 días de incubación. Después de 5 días, seleccionar aquellas placas que contengan entre 10 y 150 colonias

Considerar las cuentas de placas con 10 a 150 colonias como las adecuadas para el informe. Multiplicar por el inverso de la dilución, considerando los criterios de la NOM-092-SSA1-1994 y reportar como UFC/g o ml

Método extensión en placa

Método vertido en placa

Pipetear asépticamente 0,1 ml de cada dilución en placas de agar DRBC solidificadas previamente vertidas

Esparcir el inóculo con una varilla de vidrio doblada estéril.

Colocar cada dilución en una placa por triplicado.

Utilizar una pipeta estéril con tapón de algodón para colocar porciones de 1,0 ml de la dilución de la muestra en placas de Petri

Añadir inmediatamente 20-25 ml de agar DG18 templado

Mezclar el contenido girando suavemente los platos en el sentido de las agujas del reloj y luego en el sentido contrario

Agregar agar dentro de 1-2 minutos; de lo contrario, la dilución puede comenzar a adherirse al fondo del plato

Desde la preparación de la primera dilución de la muestra hasta el vertido o el recubrimiento de la placa final, no deben transcurrir más de 20 minutos

Incubar las placas en la oscuridad a 25 ° C.

Contar las placas después de 5 días de incubación. Si no hay crecimiento a los 5 días, vuelva a incubar durante otras 48 h.

Cuente las placas que contienen de 10 a 150 colonias.

Reportar como UFM/g o ml.

*Si el tercer dígito es 6 o más, redondee al dígito anterior (456 = 460)

*Si es 4 o menos, redondee al dígito inferior (454 = 450)

*Si el tercer dígito es 5, redondee al dígito siguiente si los primeros 2 dígitos son un número par (445 = 440)

*Redondee al dígito anterior si los primeros 2 dígitos son un número impar (455 = 460)

Cuando las placas de todas las diluciones no tengan colonias, informe los recuentos de moho y levadura como menos de 1 veces la dilución más baja utilizada.

Metodologias convencionales

(Tabla)