Tecnicas de biologia molecular

Tecnicas de biologia molecular

1. Extracao de DNA

   • https://www.docsity.com/pt/aula-08-extracao-e-quantificacao-de-acidos-nucleicos-dna-e-rna/4830362/
   • Etapa da Lise
   • Purificacao do DNA
   • Precipitacao do DNA
   • Reidratacao do DNA

2. PCR

   • Material
     • Amostra de DNA DNA Polymerase Primer Foward and Reverse Tampao da Enzima MgCl2 dNTP
   • Aplicacoes
     • - Diagnosticos de patogenos e doencas hereditarias - Diagnosticos de anormalidades cromossomais - Identificacao de mutacoes - Mutagenese - clonagem de genes - Sequenciamento - Genotipagem
   • Objectivo
     • Amplificacao do numero de copia do DNA em bilhoes de vezes
   • Principio
     • reacao enzimatica de polimerazacao de DNA in vitro

3. Eletroforese em gel de agarose

   • Objetivo
     • visualizacao de presenca ou ausencia de DNA Principio: apos uma aplicacao da corrente eletrica, o DNA (carga negativa) migra para o polo positivo
   • Material
     • -Gel de agarose -Tampao TAE-Intercalante de DNA para visualizacao- Marcador do peso molecular- Amostra do DNA
   • Aplicacoes

4. Tecnicas baseada no uso de PCR

   • Sequenciamento do DNA
     • Determina a ordem precisa de nucleotideos em uma molecula de DNA Principio: sintese da copia do DNA de interesse utilizando nucleotideos modificados
     • Materiais
       • -DNA molde -Iniciador -Taq polimerase -dNTPs -ddNTPs -MgCl2 -Tampao
   • Fingerprinting genetico
     • Utilidade
       • - Teste Paternidade - Identificacao criminal - Analise forenses - Identificacao de doencas - Analises em processos industriais - Diferenciacao de microrganismos
     • Etapas
     • Microsatelite
       • Principio: Execucao da tecnica de PCR utilizando iniciadores para regioes repetidas(microsatelites) - contem entre 15 a 30 pares de base
     • RAPD
       • Principio: utilizacao de iniciadores inespecificos que se anelam em diversas regioes ao longo do DNA genomico
     • DGGE
       • Utilizadas na caracterizacao de populacao microbianas
     • ARDARA
       • Diferenciacao entre isolados - separacao de especies para identificacao. Principio da tecnica- Realizacao de PCR convencial utilizando inciadores para DNA ribossomal - Apos PCR, o DNA amplificado é submetido a digestao com enzimas de restricao - Eletroforese em gel de agarose - Padroes da bandas diferentes indicam especies diferentes
   • Southern Blot
     • Detetar um DNA especifico numa mistura
   • Nothern Blot
     • Tecnica analoga ao southern blot, com RNA, importante para analisar a experessao de genes

5. enzima de restricao

   • Objetivo
     • clivagem de uma regiao especifica do dna

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