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Description
Mind Map by Daniela Monroy, updated more than 1 year ago
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Created by Daniela Monroy
about 7 years ago
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Extracción de RNA
- Técnica de Trizol
- 1. Homogenización
- En un tubo Eppendorf de 1.5 mL, homogenizar la pellet
(muestra) con 1 mL de reactivo Trizol. Cuando se ocupe mezclar
suavemente con micro pipeta.
- 2. Fase de separación
- Incubar la muestra homogenizada
durante 15 minutos a temperatura
ambiente
- Adicional 200ul de cloroformo, tapar
perfectamente el tubo
- Agitar x 15 segundos con
fuerza
- Incubar por 2 a 3 minutos a temperatura
ambiente y en posición vertical
- Centrifugar las muestras a 14000rpm por 10 minutos, después la
mezcla se separa en una fase inferior roja, fase de fenol cloroformo,
en una interfase y en una fase incolora superior, la cual contiene
exclusivamente el ARN
- Centrifugar las muestras a 14000rpm por 10 minutos, después la
mezcla se separa en una fase inferior roja, fase de fenol cloroformo,
en una interfase y en una fase incolora superior, la cual contiene
exclusivamente el ARN
- Incubar por 2 a 3 minutos a temperatura
ambiente y en posición vertical
- Agitar x 15 segundos con
fuerza
- Adicional 200ul de cloroformo, tapar
perfectamente el tubo
- 3. Fase de precipitación
- Transferir la fase acuosa cuidadosamente a un tubo
Eppendorf nuevo
- Adicionar 0.5 mL de
isopropanol para precipitar el
RNA
- Incubar el tubo x 10 min a T
amb y en posición vertical
- Centrifugar a 10000 rpm por 10 min
- Centrifugar a 10000 rpm por 10 min
- Incubar el tubo x 10 min a T
amb y en posición vertical
- Adicionar 0.5 mL de
isopropanol para precipitar el
RNA
- 4. Fase de lavado
- Remover el sobrenadante
cuidadosamente y eliminarlo
- Adicionar 1 mL de EtOH al 75% al
pellet para la varlo
- Mezclar por agitacipon
- Centrifugar a 6000 rpm por 5 min
- Eliminar el sobranadante
- Eliminar el sobranadante
- Centrifugar a 6000 rpm por 5 min
- Mezclar por agitacipon
- Adicionar 1 mL de EtOH al 75% al
pellet para la varlo
- 5. Fase de disolución
- Secar a temperatura ambiente,
colocando el Eppendorf con el ARN
sobre una toalla de papel estéril
- Adicionar 30 microL de agua libre de RNAsa
- Disolver el RNA por pipeteo suave, opcionalmente incubar por 10 min a 55-60°C
- Disolver el RNA por pipeteo suave, opcionalmente incubar por 10 min a 55-60°C
- Adicionar 30 microL de agua libre de RNAsa
- Secar a temperatura ambiente,
colocando el Eppendorf con el ARN
sobre una toalla de papel estéril
- Remover el sobrenadante
cuidadosamente y eliminarlo
- Transferir la fase acuosa cuidadosamente a un tubo
Eppendorf nuevo
- Incubar la muestra homogenizada
durante 15 minutos a temperatura
ambiente
- En un tubo Eppendorf de 1.5 mL, homogenizar la pellet
(muestra) con 1 mL de reactivo Trizol. Cuando se ocupe mezclar
suavemente con micro pipeta.
- 1. Homogenización
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