Práctica 10: lípidos y reacción de Hanus

PRÁCTICA 10. LÍPIDOS

Conjunto heterogéneo de moléculas orgánicas cuyas propiedades comunes son su insolubilidad en agua y solubilidad en solventes no polares como el benceno, cloroformo, éter, etc. Suelen ser moléculas de número relativamente alto de átomos de carbono e hidrógeno y bajo en átomos de oxígeno; ciertos lípidos también poseen átomos de fósforo, nitrógeno y azufre en su molécula. Cualquier clasificación presenta sus limitaciones y la nomenclatura puede producir falsas Interpretaciones. Las funciones de los lípidos son muy variadas y las más aceptadas actualmente son las siguientes: función estructural, actúan como material energético y de reserva, intervienen en el transporte de compuestos energéticamente activos, componentes protectores de la pared celular de ciertas bacterias, plantas, insectos y vertebrados, sustancias de gran actividad biológica como vitaminas y hormonas, actúan como aislante térmico y protección alrededor de determinados órganos

EXPERIMENTO 1. REACCIÓN DE HANUS.

A través del grado de insaturación de los ácidos grasos que forman parte de un lípido es uno de los factores determinantes de sus propiedades físicas, químicas y fisiológicas. Se ha observado que aparecen más dobles enlaces en los triacilgliceroles de almacenamiento y en los lípidos estructurales cuando la temperatura ambiente disminuye. El reactivo de Hanus es una solución de yodo y bromo que nos permite determinar el grado de insaturación de un lípido midiendo la capacidad que tiene para fijar halógenos en su molécula.

Preparar una serie de 4 tubos de ensayo etiquetar y añadir 6 mL de la solución indicada en el tubo correspondiente de acuerdo con la tabla

Añadir a cada tubo 10 gotas del reactivo de Hanus y agitar vigorosamente. Proteger de la luz con una bolsa negra y colocar debajo de la mesa. Registrar lecturas a tiempos de 20, 40, 60 y 80 minutos, observando el grado de decoloración de cada tubo en la tabla

EXPERIMENTO 2. EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS DE CEREBRO.

Macerar completamente la muestra de cerebro en un mortero, hasta obtener una consistencia homogénea. Cuando se obtiene la consistencia deseada, agregar gradualmente 20 mL de una mezcla 200:100:1 de cloroformo-metanol-ácido clorhídrico y con el pistilo del mortero mezclar perfectamente bien.

Agregar 2 mL de HCl 1N (NO OLVIDAR), mezclar y vaciar el contenido en tubo Falcon para posteriormente centrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos. Después de centrifugado el tubo, separar la fase metanólica, el paquete celular y la clorofórmica.

Desechar el paquete celular. La fase clorofórmica se usará para la identificación del colesterol, y la metanólica servirá para la identificación de cerebrósidos. Registre sus resultados.

EXPERIMENTO 3. IDENTIFICACIÓN DE FOSFOLÍPIDOS DE CEREBRO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

De la fase clorofórmica obtenida en el experimento anterior y con la ayuda del profesor aplicar una gota con una pipeta Pasteur en una cromatoplaca, aproximadamente a 2 cm de altura de la base. Repetir el mismo procedimiento en otra cromatoplaca.

Permitir que el cloroformo se evapore e introducir en una cámara de vidrio que contenga como solvente de elución, una mezcla de cloroformo–metanol–ácido acético–agua (65:25:8:4). Dejar desarrollar las cromatoplacas hasta el frente del solvente ya marcado; retirar las cromatoplacas y dejarlas secar.

Una cromatoplaca se revelará con ninhidrina que pondrá de manifiesto la presencia de los fosfoaminolípidos, la reacccion se lleva a cabo al calentarse a 100°C por 10 minutos.La otra cromatoplaca será revelada en cámara de Iodo sublimado. Registre sus resultados.