PROCESO DE INHIBICIÓN ENZIMÁTICA.

INHIBICIÓN ENZIMÁTICA.

Preparar 6 tubos problema (y numerarlos) y un tubo testigo.

Vertir 0.5 mL de Sacarosa

0.2 M en el tubo testigo, 0.10 mL en el tubo 1, 0.20 mL en el tubo 2, 0.30 mL en el tubo 3, 0.40 mL en el tubo 4, 0.50 mL en el tubo 5 y 0.60 mL en el tubo 6.

Añadir 0,5 mL de inhibidor en regulador de acetatos

0.005 M a pH

4.7 en cada tubo.

Agregar 0.5 mL de agua al tubo testigo, 0.90 mL al tubo 1, 0.80 mL al tubo 2, 0.70 mL al tubo 3, 0.50 mL al tubo 4 y 0.20 mL al tubo 5.

Preincubar todos los tubos por 5 minutos a temperatura ambiente.

Añadir 0.5 mL de enzima 10

Pg/mL a cada tubo problema.

Incubar todos los tubos por 5 minutos a temperatura ambiente.

Añadir 0.5 mL de 3,5-

DNS + 0.5 mL

de enzima al tubo testigo.

Añadir 0.5 mL de 3,5-DNS a cada tubo problema.

Calentar todos los tubos por 5 minutos a 92°C en baño maría.

Colocar en baño con hielo y diluir con 2.0 mL de agua destilada en cada tubo.

Leer en un espectrofotómetro a 540 nm.