UD 8. Inmounohematología y hemocompatibilidad

UD 8. Inmounohematología y hemocompatibilidad

1. Introducción

   • Transfusión: procedimiento mediante el cual se pasa sangre, o alguno de sus componentes, de un donante a un receptor.
     • Objetivos: reponer volumen sanguíneo, aumentar la Hb y la capacidad de transporte de oxígeno, corregir niveles de proteínas o otros componentes sanguíneos.
     • Factor determinante: compatibilidad entre donante y receptor, no se produzca una reacción inmunológica entre Ag y Ac de donante-receptor.
       • En la mb de las células sanguíneas, hay antígenos que determinan:
         • El grupo sanguíneo: 1 o + Ag presentes en células sanguíneas, codificadas x un locus o por 2 o + genes homólogos ligados.

2. Grupos sanguíneos

   • Ag A y B en la superficie de los hematíes. Y en el plasma hay Ac que pueden reaccionar con ellos: A, B y AB (ABO).
     • Ac importantes en las reacciones transfusionsles
       • IgG - provoca la enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN)
       • IgM - no atraviesan BHP
       • IgA - secreciones
   • Sistemas ABO y Rh
     • Sistema ABO
       • Subgrupos A y B
         • Mutaciones del gen ABO alteran eficiencia de la transferasa codificada o modifican su afinidad x el sustrato en el q actúan
           • Variantes cuantitativas - menor cantidad de Ag A o B en la mb Hem
           • Variantes cualitativas - anomalías estructurales antigénicas
           • Subgrupos A + comunes. A y A1 80% y A2 20% / Grupo AB - subgrupos A1B y A2B
             • No aglutinan con los antisueros anti-A y anti-B y en prueba celular se confunden como grupo O - detectados x discrepancias entre la prueba celular y sérica
               • 1 Ac (anti-B los subgrupos A débiles y anti-A los subgrupos B débiles / Grupo O 2 Ac (anti-A y anti-B)
       • Grupo Bombay
         • 2 alelos recesivos del gen H (hh) carecen de estereasa H, no producen H ni AgA ni AgB
           • Análisis de suero aglutina con todos A, B, AB y O. Ac anti-ABO y anti-H
       • Herencia del sistema ABO
       • Cadenas cortas de oligosacáridos unidos a esfingolípidos de la mb Hem. Parte común de los Ag, diferencia la terminación
         • Expresión de los Ag controlada x: gen H (Cr19) y Gen ABO (Cr9) - codifica enzimas glicotranferasa
           • Transferasa H cataliza la incorporación de una L-fucosa = AgH sintetiza AgA y AgB
             • Gen ABO codifica 3 alelos:
               • Alelo A: xra transferasa A, cataliza la adición de un residuo N-acetilgalactosamina al AgH = AgA
                 • Grupo A: AgA en sup celular Hem. En suero Ac anti-B
               • Alelo B: xra transferasa B, incorpora residuo D-galactosa al AgH = AgB
                 • Grupo B: AgB en sup celular Hem. En suero Ac anti-A
               • Alelo O: xra prot sin actividad glicosiltransferasa, SIN modificación del AgH
                 • Grupo O: AgH en sup celular Hem. En suero Ac anti-A/anti-B
               • Ac reactivos contra los Ag no presentes en los Hem propios
                 • Grupo AB: AgA y AgB en sup celular. En suero ni Ac anti-A/anti-B
     • Sistema Rh
       • Fenotipos
         • Fenotipos D parcial
           • D, carece parte del Ag (varios epítopos)
         • Fenotipos D débil
           • Hem con poco AgD,
             • Respuesta débil ante antiglobulina
             • Respuesta fuerte en una transfusión
           • Donante Rh+ y receptor Rh-
         • Fenotipo Rh null o nulo
           • No hay Ag del sist Rh x mutación en gen RHAG produce anemia hemolítica crónica
       • Herencia del factor Rh
       • +50Ag: D, C, c, E y e. Rh+ y Rh - presencia o ausencia del AgD
         • Rh+ tienen AgD en los Hem, donación solo Rh+
         • Rh- no tienen AgD en los Hem, donación a Rh+ y Rh-
         • AgD detectado por aglutinación directa con suero anti-D. Genotipo Cr1:
           • Gen RHD: codifica AgD
           • Gen RHCE: codifica Ag C, c, E y e. Formas alélicas: CE, Ce, cE y ce
           • Gen RHAG: codifica glicoproteína asociada a Rh
           • Ac contra Ag Rh inmunes, aparecen tras el contacto. Activos a 37ºC, no fijan complemento, disminuyen la vida media Hem y los destruyen extravascularx, EHRN. Anti-D, anti-E y Anti-c
     • Compatibilidad
   • Otros sistemas de grupos sanguíneos
     • Sistema Kell
       • Ac: IgG inmnes, detectables con antiglobulina directa, poco frecuentes y clínicax significativos: reacciones hemolíticas postransfusionales, EHRN
     • Sistema Kidd
       • Ag: Jka y Jkb
       • Ac: evanescentes y títulos indetectables - reacción hemolítica retardada (2º contacto)
     • Sistema Duffy
       • Dos alelos codominantes en el Cr1, 2 Ag: Fya y Fyb
       • Fenotipos: étnia blanca - Fy(a+b-), Fy(a+b+), Fy(a-b+) / étnia negra - Fy(a-b-)
         • Fya y Fyb receptores Plasmodium vivax
         • Fy(a-b-) resistencia natural
       • Ac: étnia negra y pacientes transfundidos

3. Patologías relacionadas con la hemocompatibilidad

   • Enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN)
     • Hemólisis fetal o neonatal x paso de Ac maternos x barrera hemoplacentaria
       • Hemolisis fetal - anemia, aumento bilirrubina, muerte
         • Ac: IgG atraviesa placenta
         • Anti-D y anti-Kell
         • Ac ABO: ictericia leve
         • Prevención: madre Rh- suministro de antiglobulina antiRh a las 28 semanas y tras el parto. Destrucción rápida de los Hem del feto en circulación materna. Tras el parto, control de signos de hemólisis en el bebé.
   • Anemias hemolíticas
     • Anemia hemolítica autoinmune (AHAI)
       • AHAI por auto-Ac calientes
         • 37ºC - IgG reactivos
       • AHAI por auto-Ac fríos
         • < 37ºC - IgM reactivos
       • Hemoglobinuria paroxística por frío
         • Unión a Ag a< 37ºC - IgG. Causan hemólisis a 37ºC
       • Diagnóstico: mediante test de Coombs directo o test directo de antiglobulina
       • Producción Ac anti-Ag mb Hem
     • Anemia hemolítica inducida por fármacos
       • Diagnóstico: test de Coombs directo y solución: suprimir tto
   • Reacciones hemolíticas postransfusionales
     • Reacción Ac del suero del receptor, con Ag de los Hem donante
     • Reacción inmediata o retardada
     • Según gravedad: hemólisis moderada o shock con fracaso renal

4. Técnicas para el estudio de la hemocompatibilidad

   • Técnicas de aglutinación
     • Es la + utilizada para la detección de Ag Hem. Suspensión de Hem + Ac específicos para el Ag
     • Detección de Ac: suero/plasma problema + Hem con Ag específico
   • Preparación de las muestras
     • Preparación de una suspensión Hem
       • Lavado con solución salina/PBS para eliminar plasma, Hem hemolizados, coágulos...
         • Plasma/suero - ambas. Expt: Ac requieren activación del complemento con SUERO
     • Preparación de células A, B y O
       • Suspensiones de Hem de un grupo en concreto
   • Aglutinación en tubo y en placa
     • Técnica de aglutinación en placa
     • Técnica de aglutinación en microplaca
       • Pocillos recubiertos de Ac
         • Aglutinación - rojo uniforme
         • No aglutinación - botón rojo fondo
       • Visual / automatizada
     • Técnica de aglutinación en tubo
       • Aglutinación - botón rojo (macroagregados)
       • No aglutinación - Hem resuspendidos en el antisuero
   • Aglutinación en columna de gel
     • Tarjetas DG Gel
       • Columnas de gel
         • Aglutinación: agregados de Hem, pierden elasticidad en mb. No pasan a través de los poros del gel.
         • No aglutinación: Hem mantienen mb intactas y atraviesan los poros del gel
       • Tipos de tarjetas DG-Gel
     • Separación Hem según estado de aglutinación
   • La lectura de los resultados
     • Graduación 4+ - 0, va de más aglutinado a menos

5. Pruebas de hemocompatibilidad

   • Determinación del grupo ABO
     • Técnicas de tipificación ABO
     • Discrepancias entre las pruebas celular y sérica
       • Discrepancias por problemas Hem
         • AgB adquirido
         • Glóbulos poliaglutinables
         • Campos mixtos
         • Ac esperados no presentes
   • Determinación del grupo Rh
     • Determinación del AgD
     • Determinación del genotipo del sistema Rh
   • Detección de Ac irregulares
   • Técnicas para la detección de Ac irregulares
     • AgA débil o ausente
   • Pruebas cruzadas
     • Prueba cruzada mayor
     • Prueba cruzada menor

6. Pruebas inmunohematológicas diagnósticas

   • Pruebas de la antiglobulina
     • Prueba de antiglobulina directa (PAD) / Test de Coombs directo
     • Prueba de antiglobulina indirecta (PAI) / Test de Coombs indirecto

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