Flashcards
Inhibición in vitro de las enzimas alfa-amilasa y lipasa pancreática por fracciones fenólicas de extractos etanólicos de hojas de Yacón
Cards in this deck (12)
- 1Inhibición in vitro de las enzimas alfa-amilasa y lipasa pancreática por fracciones fenólicas de extractos etanólicos de hojas de Yacón
- 2objetivo de la investigación: Fue determinar el efecto inhibidor in vitro de las enzimas alfa-amilasa pancreática y lipasa pancreática, por fracciones fenólicas de extractos etanólicos de hojas de yacón cultivadas en dos municipalidades colombianas: Chía, en el departamento de Cundinamarca, y San Francisco, en el departamento de Antioquía.Palabras claves:
Ácidos fenólicos; alfa-amilasa pancreática; flavonoides; lipasa pancreática; yacon. - 3Introducción: Uno de los problemas prevalentes en la salud de la población es la obesidad, es por ello que la prevención y el tratamiento de la obesidad son prioridades importantes para los sistemas de salud lo cual es necesario desarrollar otras modalidades de tratamiento que produzcan mejores resultados; los suplementos producidos a partir de extractos de plantas y terapias a base de dietas, son algunas de las estrategias más comunes para bajar de peso en medicina complementaria y alternativa.Parte experimental
Se utilizaron hojas de yacón colectadas en cultivos establecidos en el
municipio de Chía (Cundinamarca),y en el municipio de San Francisco
(Antioquia). Las
hojas fueron seleccionadas considerando su buen estado
fitosanitario y tamaño similar; adicionalmente una planta
completa fue enviada al Herbario Nacional de Colombia,
adscrito al Instituto de Ciencias Naturales, Facultad de
Ciencias de la Universidad Nacional de Colombia (Sede
Bogotá), para la certificación de la identidad botánica,
obteniéndose los números de colección 576675 y 576676. - 4Extractos etanólicos de hojas de yacón: La obtención de los extractos se realizó mediante percolación, a partir de 5 Kg de las hojas previamente maceradas y pulverizadas, usando como solvente etanol del 70 % (v/v) .El producto obtenido se filtró y envasó en frascos de vidrio de color ámbar. Parte de este extracto fue concentrado a presión de 50 mbar y temperatura de 50 °C en un rota-evaporador Laborata 4000 (Heidolph), luego fue almacenado a 4 °C.Separación de las fracciones fenólicas:
Se realizó mediante cromatografía de columna, usando la resina Amberlita
con una velocidad de flujo del solvente de 10 mL/min18. - 5Actividad inhibitoria alfa-amilasa La reacción se llevó a cabo en placas de microtitulación de polipropileno de 96 pozos Nunc. Un volumen de 25 μL de la cada fracción fenólica se mezcló con 25 μL de la solución de la enzima alfa-amilasa pancreática ,previamente disuelta en tampón salino fosfato 0,1 M (pH 6,9) hasta una concentración de 0,5 mg/mL. La mezcla se incubó a 25 °C por 10 min, luego se adicionó 25 μL de una solución de almidón (0,5 % p/v) disuelto en tampón salino fosfato 0,1 M y se incubó a 25°C por 10 min. A la reacción se le adicionó 50 μL del cromógeno DNS (ácido dinitrosalicílico), a una concentración de 96 mM, seguido de incubación en agua hirviente por 5 min y enfriamiento a temperatura ambiente. La absorbancia de la muestra (AM) se leyó a la longitud de onda de 540 nm en el lector de placas . El porcentaje de inhibición (% I) se calculó mediante la ecuación: % I = (1-AM/AC) x 100El control representará el 100 % de la actividad de la enzima
y corresponde a la mezcla de reacción sin la muestra (AC), la
cual será reemplazada por el diluyente (25 µL de MeOH 70
% v/v). Como control positivo de la inhibición se usó el
oligosacárido acarbosa
- 6Actividad inhibitoria lipasa pancreática: La inhibición de la enzima se realizó mediante método espectrofotométrico. La reacción se llevó a cabo en placas de microtitulación de polipropileno de 96 pozos Nunc. cada fracción fenólica se incubó con 150 μL del sustrato, compuesto por una mezcla de p-nitrofenilpalmitato (p-NPP) 0,2 mM, ácido deoxi-taurocolico 5 mM disuelto en tampón fosfato monobásico 50 mM (pH8,0). Después de la pre-incubación se adicionó 25 µL de la enzima lipasa pancreática previamente disuelta en buffer de reacción a la concentración de 10 mg/mL. Después de incubación a 37 °C por 5 min, se midió la absorbancia de cada mezcla de reacción a la longitud de onda de 410 nm en un lector de placas. Como control positivo del ensayo se usó tetrahidrolipistatina.Discusión de resultados:
El ensayo de inhibición alfa-amilasa fue positivo para todas
las fracciones eluídas de la Amberlita XAD-2, obteniéndose
porcentajes de inhibición mayores al 40 %, Aunque
las fracciones de Chía presentaron porcentajes de inhibición
enzimática relativamente superiora los
observados en las fracciones de San Francisco, el análisis de ANOVA mostró que no existe diferencia
significativa entre ellas. El control positivo acarbosa, causó inhibición del 50 % de la actividad alfaamilasa
pancreática.
- 7Hoja de yaconEl análisis de regresión, entre la actividad inhibitoria alfaamilasa
pancreática y el contenido de fenoles totales, mostró
que existe asociación positiva entre estas variables, tanto en
las fracciones de Chía como en las de San Francisco. Por el contrario, no se observó asociación entre la actividad inhibitoria alfa-amilasa y el
contenido de flavonoides totales. Por lo anterior, la inhibición alfa-amilasa podría atribuirse a los ácidos fenólicos
simples y polifenoles presentes en las hojas de yacón.
- 8Conclusiones: El lainvestigacion realizada muestra que las hojas de yacón cultivadas en los municipios de Chía y San Francisco (Colombia), presentan ácidos fenólicos y flavonoides que podrían inhibir la actividad catalítica de enzimas digestiva como la alfaamilasa y lipasa pancreática, respectivamente.Referencias:
1. R Eckel, D York, S Rössner, V Hubbard, I Caterson, S St Jeor,
L Hayman, R Mullis, S Blair. American Heart Association:
Prevention conference VII obesity, a Worldwide epidemic
related to heart disease and stroke: executive summary.
Circulation, 110, 2968-2975 (2004).
2. A Field, E Coakley, A Must, J Spadano, N Laird, W Dietz, E
Rimm, G Colditz. Impact of overweight on the risk of
developing common chronic diseases during a 10-year period.
Arch. Intern. Med., 161, 1581-1586 (2001).
3. Expert panel on the identification, evaluation, and treatment of
overweight in adults: Clinical guidelines on the identification,
evaluation, and treatment of overweight and obesity in adults:
executive summary. Am. J. Clin. Nutr., 68, 899-917 (1998).
4. E Poggiogalle, S Migliaccio, A Lenzi, L Donini. Treatment of
body composition changes in obese and overweight older adults:
insight into the phenotype of sarcopenic obesity. Endocrine.,
47, 699-716 (2014).
5. A Howard. The historical development, efficacy and safety of
very low calorie diets. Int. J. Obes., 5(3), 195-208 (1981). - 96. M Abdollahi, B Afshar-Imani. A review on obesity and weight loss measures. Middle. East. Pharmacy, 11, 6-10 (2003). 7. R Akilen, Z Pimlott, A Tsiami, N Robinson. The use of complementary and alternative medicine by individuals with features of metabolic syndrome. J. Integr. Med., 12(3), 171-174 (2014). 8. S Hasani-Ranjbar, Z Jouyandeh, M Abdollahi. A systematic review of anti-obesity medicinal plants - an update. J. Diabetes. Metab. Disord., 12(1), 28 (2013). 9. H de Almeida Paula, M Abranches, C de Luces Fortes Ferreira. Yacón (Smallanthus sonchifolius): a food with multiple functions. Crit. Rev. Food. Sci. Nutr., 55(1), 32-40 (2015).10. G Delgado, W Tamashiro, M Maróstica Junior, G Pastore.
Yacón (Smallanthus sonchifolius): a functional food. Plant.
Foods. Hum. Nutr., 68(3), 222-228 (2013).
11. G Gonzales, C Gonzales-Castañeda, M Gasco. A mixture of
extracts from Peruvian plants (black maca and yacón) improves
sperm count and reduced glycemia in mice with streptozotocininduced
diabetes. Toxicol. Mech. Methods., 23(7), 509-518
(2013).
12. S Genta, W Cabrera, M Mercado, A Grau, C Catalán, S
Sánchez. Hypoglycemic activity of leaf organic extracts from
Smallanthus sonchifolius: Constituents of the most active
fractions. Chem. Biol. Interact., 185(2), 143-152 (2010).
13. M Roselino, N Pauly-Silveira, D Cavallini, L Celiberto, R Pinto,
R Vendramini, E Rossi. A potential symbiotic product improves
the lipid profile of diabetic rats. Lipids. Health. Dis., 11, 114
(2012).
14. K Valentová, F Sersen, J Ulrichová. Radical scavenging and
anti-lipoperoxidative activities of Smallanthus sonchifolius leaf
extracts. J. Agric. Food. Chem., 53(14), 5577-5582 (2005).
15. S Terada, K Ito, A Yoshimura, N Noguchi, T Ishida.
Constituen - 1016. Z Xiang, F He, T Kang, D Dou, K Gai, Y Shi, Y Kim, F Dong. Anti-diabetes constituents in leaves of Smallanthus sonchifolius. Nat. Prod. Commun., 5(1), 95-98 (2010). 17. M Polanco, M García. Caracterización morfológica y molecular de materiales de Yacón (Smallanthus sonchifolius Poep. and Endl) H. Robinson colectados en la eco región eje cafetero de Colombia. Revista de Investigación Agraria y Ambiental (RIAA), 4 (2), 97-116 (2013). 18. K Osler, R Goodwin. A general use of Amberlite XAD-2 resin for the purification of flavonoids from aqueous fractions. J. Nat. Prod., 47(1), 188 (1983). 19. M Ozgen, F Wyzgoski, A Tulio. Antioxidant capacity and phenolic antioxidants of Midwestern black raspberries grown for direct markets are influenced by production site. Horticulture Science, 43(7), 2039-2047 (2008). 20. S Adisakwattana, B Chanathong. Alpha-glucosidase inhibitory activity and lipid-lowering mechanisms of Moringaoleifera leaf extract. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci., 15(7), 803-808 (2011).21. S Adisakwattana, T Ruengsamran, P Kampa, W Sompong. In
vitro inhibitory effects of plant-based foods and their
combinations on intestinal α-glucosidase and pancreatic α-
amylase. BMC Complement. Altern. Med., 12, 110 (2012).
22. D Lewis, D Liu. Direct measurement of lipase inhibition by
orlistat using dissolution linked in vitro assay. Clinic.
Pharmacol. Biopharm., 1, 103 (2012).
23. B Simonovska, I Vovk, S Andrensek, K Valentová, J Ulrichová.
Investigation of phenolic acids in yacón (Smallanthus
sonchifolius) leaves and tubers. J. Chromatogr. A., 1016(1),
89-98 (2003).
24. D Petinatti-Pavarini, S Petinatti-Pavarini, M Niehuesa, N
Peporine-Lopes. Exogenous influences on plant secondary
metabolite levels. Animal Feed Science and Technology, 176
(1-4), 5-16 (2012).
25. R Spitaler, A Winkler, I Lins, S Yanar, H Stuppner, C Zidorn.
Altitudinal variation of phenolic contents in flowering heads of
Arnica montana cv. ARBO: a 3-year comparison. J. Chem.
Ecol., 34(3), 369-375 (2008). - 1126. M Ganzera, M Guggenberger, H Stuppner, C Zidorn. Altitudinal variation of secondary metabolite profiles in flowering heads of Matricaria chamomilla cv. BONA. Planta. Med., 74(4), 453- 457 (2008). 27. A Albert, V Sareedenchai, W Heller, H Seidlitz, C Zidorn. Temperature is the key to altitudinal variation of phenolics in Arnica montana L. cv. ARBO. Oecologia, 160(1), 1-8 (2009). 28. F Tomás-Barberán, A Blázquez, C García-Viguera, F Ferreres, F Tomás-Lorente. A comparative study of different Amberlite XAD resins in flavonoid analysis. Phytochem. Anal., 3, 178- 181 (1992). 29. W Xie, J Li, H Li. Study on chemical constituents of Smallanthus sonchifolius. Zhong. Yao. Cai., 31(10), 1510-1512 (2008). 30. L Barrosa, T Alves, M Dueñas, S Silvac, R Oliveira, A Carvalhoa, M Henriques, C Santos-Buelga, I Ferreira. Characterization of phenolic compounds in wild medicinal flowers from Portugal by HPLC–DAD–ESI/MS and evaluation of antifungal properties. Ind. Crops. Prod., 44, 104-110 (2013).31. G Oboh, O Agunloye, S Adefegha, AAkinyemi, A Ademiluyi.
Caffeic and chlorogenic acids inhibit key enzymes linked to type
2 diabetes (in vitro): a comparative study. J. Basic. Clin.
Physiol. Pharmacol., May 12 (2014).
32. K Tadera, Y Minami, K Takamatsu, T Matsuoka. Inhibition of
alpha-glucosidase and alpha-amylase by flavonoids. J. Nutr.
Sci. Vitaminol., 52(2), 149-153 (2006).
33. J Watanabe, J Kawabata, H Kurihara, R Niki. Isolation and
identification of alpha-glucosidase inhibitors from tochu-cha
(Eucommia ulmoides). Biosci. Biotechnol. Biochem., 61(1),
177-178 (1997).
34. H Li, F Song, J Xing, R Tsao, Z Liu, S Liu. Screening and
structural characterization of alpha-glucosidase inhibitors from
hawthorn leaf flavonoids extract by ultrafiltration LC-DADMS(n)
and SORI-CID FTICR MS. J. Am. Soc. Mass.
Spectrom., 20(8), 1496-1503 (2009).
35. Y Tao, Y Zhang, Y Wang, Y Cheng. Hollow fiber based affinity
selection combined with high performance liquid
chromatography-mass spectroscopy for rapid screening lipase
inhibitors from lotus leaf. Anal. Chim. Acta., 785, 75-81
(2013). - 1236. E Lee, S Lee, B Chung, J Cho, I Lee, S Ahn, S Jang, T Kim. Pancreatic lipase inhibition by C-glycosidic flavones Isolated from Eremochloa ophiuroides. Molecules, 15(11), 8251-8259 (2010).Creado por: Annjulie Mireya Paz Anariva
Information
- Description
- Continuación se mostrara la relación que tienen la hoja de yacon y las enzimas alfa-amilasa y lipasa pancreática, que se demostró en la investigación realizada en departamentos de Colombia.
- Created by
- annjulie paz
- Views
- 265
- Tags
- Rating