DNA Analysen

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DNA-Analysen PCR (Polymerase Chain Reaction/ Polyymerase Kettenreaktion): Vervielfältigung von DNA-Abschnitten

-Am Tatort DNA-Spuren

-einzelne Sequenzen DNA typisiert, passen nur einem Menschen --> genetischer Fingerabdruck

-nicht codierter Bereich (nur Introns): Loci, kleiner DNA Stücke wiederholen sich tandemartig (im Gespann)

--> Short Tandem Repeats (STR) 6-7 ca.

-Anzahl Wdhs variiert unter den Menschen

--> Anzahl wird für den genetischen Fingerabdruck benutzt

-STR an verschiedenen Stellen im Genom: diese Loci/Orte haben Namen wie vWF, FGA, THO1, D1S80

--> Abkürzungen stehen für das Gen, wo sich Loci befindet

-Basensequenz, die Loci einrahmen beim Menschen gleich

--> passende Primer (komplementär an eine Stelle des Abschnittes) werden konstruiert

-Reaktionsansatz: isolierte DNA (STR), Nucleotide(um komplementären STrang aufzubauen), Puffer (ph-Wert stabil --> Polymerase kann gut arbeiten), zwei passende Primer, hitzstabile DNA-Polymerase (Taq-Polymerase)

-Thermocycler (plastikröhrchen mit Reaktionsansatz hinein) wiederholt Temperaturen zyklisch

Bei 95° wird doppelsträngige DNA gespalten (denaturierung), wird erhitzt für ca. 20-30 sek.

--> Wasserstoffbrücken zwischen Basen werden zerstört

Bei 60° lagern sich die Primer an (Hybridisieren)

--> schnelles Herunterkühlen, damit sich Einzelstränge nich erneut verbinden (20-40sek)

-Temp. hängt vom Primer ab, von Länge und Sequenz (Nucleotiden)

Bei 72° verlängert Taq-Polymerase den Komplementärstrang (Polymerisieren)

-in 5´Richtung

-30sek./500 Basenpaare

-Nach einem Zyklus DNA verdoppelt

-Vorgang wir n mal wiederholt

-nach 20 Zyklen 1.000.000 Kopien

-Gelelektrophorese:sichtbar machen der DNA Stücke (DNA eigentlich unsichtbar --> einfärben blau) und trennen diese voneinander, sortieren nach Größe

-elektrisch aufgeladenes Gelmatrixfeld mit einem Plus- und einem Minuspol

-DNA in Probentaschen in der Matrix

-Moleküle/DNA Fragmente sind unterschiedlich groß und damit auch unterschiedlich stark oder schwach geladen

-wandern aufgrund Ladung weiter oder kürzer

-Gel beeinflusst ebenfalls wie weit DNA-Moleküle wandern

-kürzere wandern weiter, längere bleiben hängen

-DNA=elektronegativ geladen --> wandert so durch Gelmatrix in Richtung Pluspol

-an Seite Matrix eine Vergleichsbande

-Matrix mit Ethidiumbromid einfärben --> unter UV Licht werden Bande sichtbar

-Gebrauch:

Kriminalfälle: Vergleichen der am Tatort gefundenen DNA mit der des Verdächtigen

Vaterschaftstest: kein identisches Bandenmuster, aber Übereinstimmungen, Vergleichen des Bandenmusters von Kind und infragekommenden Vater

zwei unterschiedliche Banden, 1 von der Mutter 1 vom Vater

eine Bande: Mutter und Vater gleiche repeats, liegen übereinander (homozygot)