DIAGRAMA DE FLUJO-

Extracción de ADN

PCR para amplificar una cadena de ADN

Electroforesis para separación por cargas

lisis con mortero

Precipitación1

se agregan 100μl de buffer TE, y se resuspende la solución

Elección de muestra

ó un buffer que rompa las membranas de la célula

Precipitación2

desnaturaliza las proteínas se recupera el sobrenadante

interrupción de los encales de hidrógeno se recupera el sobranadante

agrega 450μl de cloroformo-octanol, centrifugación a 6000rpm x10min

Lavado

Re- suspención

en 400μl de la solución, centrifugar a 6000rpm x5min

en 200μl de la solución, centrifugar a 6000rpm x5min, desechar el sobrenadante

Desnaturalización: separa las cadenas

Alineamiento: se genera hibridación con el primer

Extensión: la polimerasa toma el ADN molde para sintetizar la cadena, y usa el primer como soporte para la nueva cadena

10 μL 5x MyTaqReactionBuffer (5mM dNTP ́s, 15 mMde MgCl2, enhancersy stabilizers)

MyTaqTM polymerase

Usando el termociclador

Estas 3fases se repiten en cada ciclo

fallas

Productos no específicos

Sin producto

muestra 1μL primer 20μM cada uno

agrega 600μl de isopropanol frío, centrifugación a 6000rpm x5min se separa el ADN de las proteína

inicio

mezcla de la muestra de ADN + buffer+ solución intercalante

Preparar según la muestra: el buffer, la solución intercalante y el gel (con agua destilaza, tampon y agarosa)

se hace la corrida, se le da voltaje permitiendo que la muestra se desplace

usando camara de electroforesis

se agrega la nueva muestra a cada pocillo

se retira el gel y se coloca en la camara de electroforesis

se coloca el gel trasluminador, se observan los resultados

fallas